摘要：细胞致瘤基因(cellular-myelocytomatosis viral oncogene,c-Myc)编码的c-Myc蛋白通过Wnt/β-catenin信号通路调节相关基因的表达,近年来引起了广泛的研究关注。本研究旨在利用原核表达系统体外表达棉铃虫(Helicoverpa armigera)c-Myc(Ha-c-Myc)基因,制备多克隆抗体,明确Ha-c-Myc的时空表达模式,并探究Ha-c-Myc在调控棉铃虫胆固醇载体蛋白-2(sterol carrier protein-2,SCP-2)基因表达中的潜在作用。通过PCR扩增Ha-c-Myc基因并克隆至pET-32a(+)原核表达载体中,构建重组表达质粒pET-32a-Ha-c-Myc,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)细胞,使用IPTG诱导蛋白表达,并通过Ni2+-NTA柱纯化重组蛋白,用重组蛋白免疫新西兰兔制备抗Ha-c-Myc多克隆抗体。利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)法检测棉铃虫不同发育时期(卵、幼虫、预蛹、蛹和成虫)和预蛹期不同组织(中肠、脂肪体、头部和表皮)中Ha-c-Myc基因的表达水平。设计合成Ha-c-Myc siRNA并转染棉铃虫Ha细胞,通过qRT-PCR分析Ha-c-Myc基因的RNA干扰后棉铃虫Ha-c-Myc基因和HaSCP-2基因mRNA表达的情况。结果表明,本实验构建了pET-32a-Ha-c-Myc重组质粒,在大肠杆菌中获得了高效表达的、大小约为65 kDa的可溶性Ha-c-Myc蛋白。经纯化得到纯度较高的蛋白,免疫新西兰兔制备了多克隆抗体,免疫印迹实验(Western blotting)表明抗体的特异性较好,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)分析显示抗体具有较高的效价。qRT-PCR实验发现Ha-c-Myc基因在棉铃虫各发育阶段均有表达,在幼龄和大龄幼虫及预蛹中表达量较高,其中预蛹的表达量最高。组织表达结果显示,Ha-c-Myc基因在预蛹不同组织均有一定表达但存在差异,在中肠部位具有高表达,而在表皮和脂肪体表达水平较低。RNA干扰的结果显示,Ha-c-Myc表达的敲降对HaSCP-2基因的转录有较大影响,导致HaSCP-2基因的相对表达水平显著性降低了50%。上述研究表明,利用pET-32a(+)原核表达系统可以有效地表达可溶性Ha-c-Myc蛋白,并且制备高质量的抗Ha-c-Myc多克隆抗体。RNA干扰证明在中肠组织高表达的Ha-c-Myc能促进HaSCP-2基因的转录表达,在棉铃虫的脂质代谢中具有重要作用。本实验结果有助于深入研究Ha-c-Myc在棉铃虫中的潜在功能及其作用机理,为探究绿色农药的新型作用靶标提供实验数据。

摘要：脂肪细胞膜相关蛋白(APMAP)是一种新型整合膜蛋白,在人体内多种组织器官中表达,能够促进前脂肪细胞向成熟脂肪细胞分化,从而维持脂肪细胞的正常生理代谢功能,并在脂肪细胞分化的过程中发挥着重要作用。目前,研究表明APMAP与人体内炎症反应的发生发展密切相关,与妊娠期糖尿病等多种疾病有关。该文对APMAP的结构和功能进行总结,综述近年来关于APMAP的研究进展。