摘要：目的建立多重PCR快速鉴定金黄色葡萄球菌检测方法,并了解nuc和nucA基因在食源性金黄色葡萄球菌中的分布状况。方法设计nuc、nucA和16S rDNA基因的引物,利用单重PCR方法和测序验证引物的特异性;建立多重PCR快速检测方法,并应用此方法对23株食源性金黄色葡萄球菌、15株其他种属细菌以及一起食物中毒样品的增菌液进行检验,以评价该方法的特异性和灵敏性。结果利用单对引物对实验室的4个菌株进行盲筛,出现的条带均为单一条带,且与目的片段长度一致,测序结果显示扩增片段为目的基因片段。建立的多重PCR方法对金黄色葡萄球菌有很好的特异性和灵敏性,灵敏度达100 cfu/μl,研究所涉及的23株食源性金黄色葡萄球菌nuc和nucA基因均为阳性。结论该方法简便、快速、特异性好、灵敏度高,适用于金黄色葡萄球菌的快速鉴定。

摘要：根据GenBank报道的停乳链球菌(Streptococcus dysgalactiae)isp基因(GenBank:CP002215.1)序列设计引物,PCR扩增得到isp基因。片段大小为1 500 bp,与从GenBank下载的序列进行同源性比对结果为98.57%。将isp基因克隆于表达载体pET-25b,成功构建了重组质粒pET-25b-isp,将重组质粒分别转化BL21(DE3),将BL21(pET-25b-isp)阳性重组菌株经IPTG诱导后,SDS-PAGE结果显示均有蛋白表达,大小分别为53 ku与目的蛋白大小相符;Western blot检测显示,表达的蛋白为目的蛋白。对成功构建的菌株BL21(pET-25b-isp)表达条件经优化后,在温度37℃,诱导时间12 h,IPTG浓度为1 mmol/L时,蛋白有较高的表达量。