摘要：目前儿童中药制剂剂型选择、辅料优选、工艺设计、包装装置等成人化倾向比较普遍,导致给药剂量不准、患儿用药顺应性差,药物有效性和安全性难以保证,药品不良反应事件频发。因此,研究开发符合儿童用药特点的制剂,突破儿童制剂关键技术迫在眉睫。分析了口服液、糖浆剂、颗粒剂等常用剂型,探讨其在儿童中药制剂中的应用情况,并针对儿童中药制剂中存在的药物溶解度低、服用口感差、给药剂量不准确等问题,探讨增溶、掩味和定量给药等共性技术的特点及应用,以期为儿童中药制剂的研发奠定基础并提供依据。

摘要：背景:对于胆管癌的治疗目前临床缺乏有效的诊治手段,抑癌基因替代疗法正逐步成为一种新型的、重要的抗肿瘤措施。P15作为一种重要的抑癌基因,发现可抑制肝癌细胞生长。但是对于其在胆管癌中的作用的相关研究尚在探索阶段,本研究为预防人胆管癌的发生提供一个理论框架。目的:通过构建稳定高表达抑癌基因p15的人胆管癌细胞模型,研究p15对胆管癌细胞增殖的影响。设计:完全随机,设立实验对照组,开放性实验研究。地点和对象:实验地点在南京医科大学生化与分子生物学研究室,研究对象为人胆管癌细胞系。干预:以稳定高表达p15的人胆管癌细胞模型为实验组,稳定表达空载体的细胞模型为对照组。将抑癌基因p15的cDNA构建到高效真核表达的质粒载体pcDNA3-neo中的EcoRⅠ/XbaⅠ位点,构建成p15真核表达质粒pcDNA3p15;通过脂质体法将pcDNA3p15质粒转染人胆管癌细胞系QBC939,经G-418筛选,获得稳定高表达p15的人胆管癌细胞模型及相应的表达空载体的细胞模型,并经Western分子杂交分析证实。主要观察指标:观察实验组和对照组细胞增殖速率、细胞克隆形成能力、细胞周期、c-Fos蛋白表达水平的差异结果:与对照组相比,p15高表达的人胆管癌细胞QBC939的增殖受到明显抑制;克隆形成实验结果表明。

摘要：隐丹参酮(cryptotanshinone,CPT)具有抗脑胶质瘤活性,但其存在溶解度低、肿瘤渗透性弱等问题,因此设计具有深度穿透、精准靶向的纳米给药系统迫在眉睫。本文采用乳化蒸发法制备了tLyp-1修饰的隐丹参酮脂质体(tLyp-1 modified liposomes loaded with CPT,tLipo/CPT),用脂质体负载CPT,并在其表面修饰具有靶向肿瘤新生血管和肿瘤细胞膜神经毡蛋白受体(neuropilin receptors,NRP)的穿膜肽tLyp-1,使CPT能够精准靶向脑胶质瘤并准确释放。通过粒径、多分散系数(polymer dispersity index,PDI)、胞内荧光参数、透射电镜扫描等确定tLipo/CPT的粒径大小为(162.2±14.6)nm,PDI为0.24±0.03;tLyp-1肽修饰的最佳摩尔比例为0.5%;靶向脂质体呈光滑圆整的球形。高效液相色谱法定量测定其包封率为(70.06±7.22)%;靶向脂质体(liposomes modified with tLyp-1 peptide,tLipo)相较于脂质体(liposomes not modified with tLyp-1,Lipo)能够被GL261细胞更多地摄取,tLipo组胞内荧光强度较Lipo组增加40%,进一步确认GL261细胞对tLipo/CPT的摄取为通过神经毡蛋白受体1(NRP-1)介导的内吞途径;MTT实验表明tLipo/CPT可显著抑制脑胶质瘤GL261细胞的增殖,其半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))为5.70μmol·L^(-1);tLipo/CPT可跨越体外血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)模型;此外,体内荧光成像实验显示,尾静脉注射DiR标记的tLipo后,0.5 h在小鼠脑部即可观察到荧光分布,且24 h后脑部仍存在荧光,进一步确定tLipo/CPT可穿透BBB,且其可通过抑制脑胶质瘤GL261细胞的增殖发挥抗脑胶质瘤作用。动物福利和实验过程均遵循南京中医药大学动物伦理委员会的规定。

摘要：目的:制备含野生型p53cDNA重组体的复制缺陷型逆转录病毒。方法:设计引物PCR扩增野生型p53cDNA,用T-A克隆的方法克隆入质粒载体pGEM-T,转化JM109,提取pGEM-T/p53重组体,双酶切得到野生型p53cDNA,然后再克隆入逆转录病毒表达载体pLXSN,转化感受态大肠杆菌JM109,筛选pL(p53cDNA)SN重组体,脂质体法转染包装细胞AM12,G-418(geneticin)筛选,收集病毒液。结果:通过PCR和重组质粒酶切筛选出重组阳性克隆,收集含pL(p53cDNA)SN重组体的逆转录病毒。结论:含pL(p53cDNA)SN重组体的复制缺陷逆转录病毒可用于转染真核细胞等进一步研究。

摘要：背景与目的:本实验拟在原核系统中表达并纯化人血管内皮抑素(endostatin),制备鼠抗人血管内皮抑素多克隆抗体。方法:设计引物扩增内皮抑素的cDNA,重组入原核表达载体并在大肠杆菌中诱导表达,应用纯化产物免疫3只小鼠。结果:构建成制备人血管内皮抑素的原核表达载体pQE-30,并转化入大肠杆菌BL21中得到表达产物,经Ni亲和层析柱纯化后进行SDS-PAGE鉴定结果为单一组分。利用纯化的人血管内皮抑素成功制备高滴度的鼠抗人血管内皮抑素多克隆抗体,并由Westernblot分析证实。结论:高纯度表达产物及多克隆抗体的制得为今后的研究提供了素材。

摘要：目的 :在原核系统中表达并纯化人血管生成抑素 (angiostatin) ,制备鼠抗人血管生成抑素多克隆抗体。方法 :设计引物扩增angiostatin的cDNA ,然后亚克隆入原核表达载体pQE ,并转化入大肠杆菌BL2 1中诱导表达并纯化 ,再用纯化的人血管生成抑素免疫小鼠并制备多抗。结果 :通过重组质粒酶切和测序分析等方法 ,筛选出重组阳性克隆 ,转化入大肠杆菌BL2 1中诱导表达并纯化成功 ,再利用纯化的人血管生成抑素制备成功鼠抗人血管生成抑素多克隆抗体。结论 :表达产物及多克隆抗体为下阶段深入研究提供了重要的实验材料。

摘要：目的　构建血小板衍化内皮细胞生长因子 (PD- ECGF)的原核表达载体。方法　设计引物扩增 PD- ECGF的 c D-NA,然后亚克隆入原核表达载体 p QE和 p ET- 32 a,并转化入大肠杆菌 JM10 9。结果　通过菌落原位杂交、PCR和重组质粒酶切分析等方法 ,筛选出重组阳性克隆。结论　此重组质粒可用于原核表达等进一步研究。