摘要：目的:构建并鉴定小鼠信号转导子和转录激活因子4(STAT4),信号转导子和转录激活因子6(STAT6)具有发夹结构小干扰RNA(shRNA)表达质粒。方法:根据STAT4和STAT6基因mRNA序列,在体外分别合成有小发夹结构的2条STAT4特异性寡核苷酸序列,2条STAT6特异性寡核苷酸序列,退火后与线性化pGenesil-3质粒连接,转化感受态细胞DH5α,扩增,纯化得到所需质粒。同时设计构建分别针对小鼠甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)的干扰质粒作为阳性对照,不具有基因同源性的非特异性基因的质粒作为阴性对照序列。通过酶切后琼脂糖凝胶电泳和基因测鉴定纯化质粒分子量及插入片段的序列。结果:经限制性酶切和测序鉴定分析证实基因插入正确,与设计的序列完全相符。结论:成功构建了针对小鼠STAT4,STAT6基因的发夹结构小干扰RNA表达载体。为今后利用基因沉默技术从转录后水平抑制STAT4,STAT6的研究奠定基础。

摘要：目的在感染甲型流感病毒（influenza Avirus，IFAV）的人气道上皮细胞（9HTEO）中观察与IFAV PB1、M2、NS、PB2、HA基因互补的反义硫代修饰寡核苷酸（ASODN）的抗病毒活性。方法细胞外体系观察设计的ASODN效率，筛选对IFAV有效的3个ASODN进行9HTEO的抗病毒效应。倒置显微镜下观察IFAV的致细胞病变作用和ASODN的细胞保护作用。MTT方法测细胞存活率，空斑试验、***、Westernblot、免疫荧光检测ASODN特异性抗病毒效应，MTF法检测ASODN对细胞的保护作用。结果IFAV感染复数（MO!）在0．1以上时，培养5d后IFAV感染的9HTEO细胞全部死亡。设计的ASODN能够提高感染细胞的存活率，且呈量效依赖关系。空斑试验、***、Westernblot、免疫荧光试验证实在细胞水平、基因转录水平、蛋白水平针对IFAV PB1、M2、NS基因mRNA转录起始点保守序列设计的ASODN具有特异性抗IFAV作用。结论ASODN具有较明显的抗病毒活性，为进一步研究和开发新型抗IFAV药物提供了实验依据。为高致病性禽流感（H5N1）的基因治疗提供了新的思路和理论依据。

摘要：目的比较RNA干扰(RNAi)技术与利巴韦林抗呼吸道合胞病毒(RSV)效应,探讨RNAi技术体外抑制RSV的有效性。方法用成功构建的表达载体pshRNA7816及利巴韦林处理HEp-2细胞,利用四甲基偶氮唑蓝比色实验检测pshRNA7816、利巴韦林的细胞毒性和对RSV感染后细胞的保护作用;通过显微镜观察pshRNA7816及利巴韦林对RSV感染细胞病变的抑制效率。结果pshRNA7816对HEp-2细胞的正常生长无明显细胞毒性作用,而利巴韦林在1.0mmol/L以上作用浓度即会对细胞产生细胞毒性作用;pshRNA7816和利巴韦林均能抑制RSV所致的细胞病变,但pshRNA7816对细胞病变抑制作用较利巴韦林强,经过pshRNA7816处理过的RSV感染细胞的细胞存活率明显高于利巴韦林对RSV的最大抑制率(P<0.05)。结论根据RNAi技术所设计的重组质粒pshRNA7816在体外细胞培养系统中较利巴韦林抗RSV活性强。

摘要：针对电磁式接触器噪音高、干扰大、可靠性低等问题,设计了一种基于N型金属—氧化物—半导体(N-metal-oxide-semiconductor,NMOS)管的新型大功率直流电子接触器。该接触器利用NMOS管的大功率特性、开关特性和导通电阻正温度系数特性,通过控制多个并联NMOS管的导通和关断功能来代替电磁式接触器的通断功能。对直流电子接触器NMOS管过压、过流等易损坏问题进行了详细分析,重点给出了接触器驱动电路、改进的剩余电流装置(residual current device,RCD)的过压保护电路、过流保护电路的实现方法,并制作了样机对NMOS管进行了测试。结果表明:该接触器硬件方案可行,运行稳定,在大功率工作环境下NMOS管电压应力满足降额要求,过流保护电路能起到正常的保护作用。该接触器具有噪音低、干扰小、可靠性高等特点,可用于太阳能发电、航空航天及铁道交通等领域。

摘要：目的研究不同饲养环境、种属、佐剂及激发方法对小鼠哮喘样炎症的影响。方法应用普通级或清洁级的BALB/c和C57BL小鼠,以鸡卵白蛋白作过敏原,采用氢氧化铝和明矾佐剂及滴鼻和雾化的激发方式制备小鼠哮喘模型,进行支气管肺泡灌洗液(BALF)炎症细胞分类记数和观察细支气管周围的嗜酸性粒细胞(Eos)炎症。结果BALB/c和C57BL小鼠嗜酸性粒细胞炎症无差异,清洁级比普通级、明矾佐剂比氢氧化铝佐剂、多次的雾化比一次滴鼻的激发方式能更明显地诱导小鼠哮喘炎症。结论小鼠哮喘炎症程度受饲养环境、种属、佐剂及激发方法的影响,实验设计时应予充分的注意。

摘要：研究目的 探讨幼年型类风湿性关节炎与血清IgG亚类改变的关系。 研究设计 病例对照研究。 患者和其它参与者 幼年型类风湿性关节炎患儿共16例,男8例,女8例。年龄5～13岁。对照组30例,男15例,女15例。年龄5～13岁,均为健康儿童。 处理方法 用多克隆抗体单向免疫扩散法测定血清IgG、IgM、IgA浓度;用双向酶联免疫法测定血清中IgG亚类。 结果 5～9岁对照组和观察组血清IgG分别为9.90±2.15和14.10±6.169/L(t=3.832,P0.5),IgM为1.47±0.36和1.50±0.65g/L(t=0.200,P>0.5)。10～13岁对照组和观察组IgG、IgA、IgM与此相近。5～9岁对照组和观察组IgG_1分别为5.501±0.976和9.715±3.746g/L(t=5.046,P0.05),lgG_3分别为0.517±0.167和0.828±0.578g/L(t=2.132,P0.05)。10～13岁观察组IgG_2显著高于对照组(P<0.01)。 结论 类风湿性关节炎患儿体内IgG水平显著增高,IgG亚类也明显增高,活动期患儿IgG_1IgG_3和IgG_4增加明显。