摘要：该研究旨在建立散装即食食品中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌3种食源性致病菌的多重荧光定量PCR检测方法,根据沙门氏菌侵染上皮细胞表面蛋白的invA基因、金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶(nuc)基因、蜡样芽孢杆菌的cer A基因分别设计3对特异性引物与探针,并对体系中引物探针的浓度以及退火温度等反应条件进行优化筛选,建立多重荧光定量PCR检测方法,同时评估其特异性、灵敏性及重复性,并应用该方法检测散装即食食品样本中致病菌,同时与国标法比对。结果表明,建立的多重荧光定量PCR检测方法能特异性地扩增沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌3种目标菌,其他菌株均不扩增,灵敏度分别为4×10^(2)、3×10^(2)、2×10^(2)cfu/mL,且批内和批间变异系数均小于2%,重复性和稳定性良好。同时用国标法和多重荧光定量PCR法对100份散装即食食品样本进行检测比对,多重荧光定量PCR法的阳性检出率略高于传统国标法,且检测时间大幅缩短。综上所述,建立的多重荧光定量PCR检测方法特异性强、灵敏度高、快速准确,在食源性致病菌快速筛查方面具有良好的应用前景。

摘要：建立了捕集阱顶空气相色谱/质谱测定水中二氯一溴甲烷的方法。采用正交实验设计对平衡温度、平衡时间、循环次数3个参数进行了优化,在平衡温度70℃、平衡时间20min、循环次数2次的优化条件下,对水中的二氯一溴甲烷进行测定。结果显示,在0.1～10.0μg/L范围内,二氯一溴甲烷的质量浓度和峰面积呈良好的线性关系,相关系数为0.9991。方法的检出限(S/N=3)为0.03μg/L,定量限(S/N=10)为0.1μg/L,回收率为83.1%～111.3%,相对标准偏差为1.7%～5.2%(n=6)。将该方法应用于水中二氯一溴甲烷的定性定量分析,效果良好。

摘要：为建立适合基层实验室快速检测创伤弧菌的环介导等温扩增(LAMP)方法,本研究针对创伤弧菌vvhA基因的保守区域设计4条引物,通过特异性识别vvhA基因中的6个独立区域快速检测创伤弧菌,利用实时浊度仪检测反应过程中产生的白色沉淀,从而实现对LAMP整个反应过程的实时监控。结果表明,本研究建立的创伤弧菌实时浊度LAMP检测方法操作简便、所需时间短、并具有高度特异性,可以在63℃恒温条件下于60 min内完成检测,特异性良好。该方法对培养的创伤弧菌的检测下限为32 cfu。同时,用建立的实时LAMP检测方法对120份海产品进行检测,共检出37份创伤弧菌阳性样品,与传统培养方法结果一致。该方法与传统方法相比,可以节省大量时间,并且对实验仪器和操作人员的要求低,具有良好的实用性。

摘要：肉类真假鉴定是食品检测工作的内容之一,目前已有多种基于PCR的肉类鉴定方法,但是鉴定种类和效率受限。本研究设计了一对基于普通PCR技术可同时鉴定8种动物源性成分的通用引物并建立了鉴定方法。该引物以线粒体DNA为靶标,利用扩增产物中不同物种间的插入缺失多态性片段大小即可鉴定山羊、绵羊、鹿、水牛、牛、牦牛、猪和骆驼8个物种,扩增后分别得到728 bp、704 bp、504 bp、453 bp、448 bp、431 bp、396 bp和326 bp的片段,每种PCR产物经Ssp I酶切后产生数量和大小不同的片段,可以进一步清晰鉴别8个物种。引物特异性测试表明和其他常见肉类动物DNA无交叉反应,DNA检测最低限度在0.01~0.05 ng。应用本方法对40份市场肉类及产品的检测表明,羊肉串、羊肉卷以及特色畜产品如驼肉、鹿肉和驴肉存在较多的掺假行为。与其他现有PCR检测方法相比,该方法具有简便易行和高通量的优点,可以作为肉类掺假筛选检测的常规方法。

摘要：建立单核细胞增生李斯特氏菌实时浊度LAMP检测方法。根据单核细胞增生李斯特氏菌hly A基因设计4条特异性引物,采用环介导等温扩增方法 (LAMP)建立单核细胞增生李斯特氏菌快速检测方法。建立的LAMP方法具有高度特异性,经对14株细菌进行扩增,单核细胞增生李斯特氏菌为LAMP阳性,其他菌株均为LAMP阴性。建立的LAMP方法对培养的单核细胞增生李斯特氏菌的检测下限为32 CFU/m L,可在60 min内完成扩增反应。用建立的LAMP方法对160份不同食品进行检测,共检出5份LAMP阳性样本,与传统培养方法结果一致。该方法与传统方法相比,可节省大量时间,且对试验仪器和操作人员的要求低,具有良好的实用性。

摘要：目的筛选适于鉴定乌贼的DNA条形码,建立鉴定舟山常见乌贼种类的DNA条形码技术体系。方法用聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)对现有5组DNA条形码引物组合进行了筛选,设计一对新的DNA条形码引物以供筛选备用。结果现有引物与部分乌贼的DNA模板存在错配而缺乏通用性,在部分乌贼DNA的扩增受阻。本实验设计的12S rRNA基因引物可以特异性扩增乌贼的DNA,提高了乌贼鉴定的准确度。结论本研究设计的12S rRNA基因引物可以作为现有乌贼DNA条形码鉴定的补充。