摘要：目的 探究CD19^(+)CD24^(+)CD27^(+)调节性B细胞在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)中的作用和临床相关性。方法 收集23例SLE患者和23例健康人群的外周血以及血浆标本,使用流式细胞仪检测并比较两组人群外周血标本中的CD19^(+)CD24^(+)CD27^(+)调节性B细胞与细胞内IL-10的表达水平,并将其细分为CD24^(high)CD27^(+)以及CD24^(mid)CD27^(+)两个亚群,同时比较血浆中各细胞因子的浓度并分析其与Breg细胞的相关性。检测治疗后SLE患者外周血中Breg细胞的变化并与治疗前进行比较,分析其与疾病发展状态之间的关系。结果 SLE患者体内的两种Breg细胞均显著升高,分别为6.09%±2.61%和12.28%±4.90%,其细胞内IL-10表达也明显增强,且CD24^(high)CD27^(+)型Breg细胞内IL-10水平高于CD24^(mid)CD27^(+)型亚群。患者血浆中IL-1β为(9.24±9.97) pg/mL,IL-10为(43.50±23.06) pg/mL,TNF-α为(11.26±7.48) pg/mL,IFN-γ为(12.83±7.27) pg/mL,较正常人均显著升高,且IL-10浓度与CD24^(mid)CD27^(+)型亚群细胞比例存在正相关。外周血中两种Breg细胞均与患者的疾病状态存在关联,经过临床药物治疗后,患者体内的Breg细胞显著下降。结论 SLE患者外周血中调节性B细胞显著升高,其分泌的IL-10相应增高,免疫调控作用增强。经过治疗,两者显著下降,提示其具有反映患者疾病状态的潜在价值。

摘要：目的建立数字PCR（dPCR）检测非小细胞肺癌（NSCLC）患者表皮生长因子受体（EGFR）基因T790M突变平台，并评估其基本性能和临床价值。方法方法学建立。收集2014年1月至2015年10月于复旦大学附属中山医院就诊的10例经EGFR—TKI治疗后发生耐药的NSCLC患者。设计EGFR基因T790M突变及野生型的引物及特异性探针，建立dPCR检测EGFR基因T790M突变平台，根据白配不同浓度标准品质粒验证该检测平台空白限、灵敏度和线性以建立最适报告和复检流程。采用dPCR和扩增受阻突变系统（ARMS）检测患者肺癌组织和血浆标本，卡方检验比较两种方法检测不同标本类型的EGFR基因T790M突变一致性，Pearson相关分析dPCR检测肺癌组织和血浆突变分子丰度的相关性。结果dPCR检测平台空白限为10拷贝，功能灵敏度为0．01％，且在0．01％～100％范围内线性良好（Y=1．226X-3．984，R^2=0．999）。dPCR和ARMS检测肺癌组织EGFR基因T790M突变一致性较高（kappa=0．80），而dPCR检测血浆突变阳性率高于ARMS（50％VS20％，P〈0．05）Pearson相关分析发现dPCR检测肺癌组织和血浆突变分子丰度高度相关（R=0．923，P〈0．05）。结论建立了高灵敏、绝对定量的dPCR检测EGFR基因T790M突变平台，其联合血浆etDNA能真正实现“液体活检”，对指导耐药后患者个体化治疗有重要价值。

摘要：目的通过研究中国人32项常规检验项目的生物学变异数据，计算检验质量目标，为制定我国临床检验质量标准提供依据。方法参考国外同行的生物学变异实验设计和计算方法，通过对22名上海中山医院检验科工作人员（男12名，女10名，年龄20～40岁，中位年龄30岁）短期（1d内5个时间点为采血时间：8：00、10：00、12：00、14：00和16：00）、长期（连续6周，每周早晨8：00为采血时间）以及对照血清（体检健康人的新鲜混合血清）的检测，计算生物学变异数据、个体指数（Ⅱ）及质量目标。结果（1）得到了32项常规检验项目的短期和长期生物学变异数据以及以长期生物学变异数据为基础的Ⅱ和质量目标。（2）发现饮食对部分检验项目的生物学变异有一定影响，其中最明显的是游离脂肪酸，餐后相对餐前的检测值平均偏低约30％。其次是超敏C反应蛋白，餐后相对餐前的检测值平均偏低约20％。但三酰甘油，餐后相对餐前的检测值平均偏高约10％。（3）得出的质量目标允许总误差适宜值与欧洲生物学允许总误差适宜值和美国临床实验室改进修正案室问质量评估指标之间存在一定差异。结论（1）本研究中载脂蛋白E和游离脂肪酸的实验结果弥补了欧洲生物学变异数据库的不足。（2）32项常规检验项目中仅少部分受到饮食因素的影响。（3）以中国人生物学变异数据为基础设立的分析质量目标和欧洲生物学质量目标基本一致，但也有少部分项目存在差异。（4）使用生物学变异数据设立分析质量目标比使用CLIA室间评估指标更实际有效。

摘要：抗体依赖性增强作用(ADE)已成为病毒致病机制、抗体药物治疗和疫苗开发的关键因素。在特定情况下,抗体能介导冠状病毒与其病毒受体或Fc受体(FcR)结合,增强病毒感染能力,进而导致ADE。ADE的发生受病毒和宿主一系列复杂因素的调节,如病毒包膜蛋白结构、与受体的亲和力、抗体水平等。文章综述了近年来ADE在多种人冠状病毒研究中的最新进展,为疫苗设计、抗体相关药物及免疫治疗等提供一定的理论依据。

摘要：目的建立KRAS G12D、TP53 C242S、IDH1 R132C突变数字聚合酶链反应(dPCR)检测平台,并初步评估其检测性能及临床应用价值。方法选取行切除手术的肝内胆管细胞癌(ICC)患者22例,设计KRAS G12D、TP53 C242S、IDH1 R132C突变位点的引物及探针,建立dPCR突变检测平台。并采用不同浓度的自配标准品质粒验证该平台的准确性、精密度、空白限、功能灵敏度及线性范围。将外周血dPCR检测结果与外周血Oseq-ctDNA及组织Oseq-T靶向测序结果进行比较。ICC患者行切除术后,每6个月采集1次外周血并跟踪随访,评估该突变检测平台对ICC患者术后疗效监测的作用。结果 dPCR平台的准确性良好[3种突变(KRAS G12D、TP53 C242S和IDH1 R132C)3个丰度的检测结果与理论值的偏差均<±15%],批内和批间精密度[变异系数(CV)]均<20%,空白限为4拷贝,功能灵敏度为0.1%,且在0.1%~10.0%范围内线性良好。ROC曲线分析结果显示,ctDNA突变谱诊断ICC的曲线下面积(AUC)为0.659,敏感性为31.8%,特异性为100%;与糖类抗原19-9(CA19-9)联合检测诊断ICC的AUC为0.841,敏感性为68.2%,特异性为100%。dPCR平台的检测结果与Oseq-ctDNA测序结果有较高的一致性(kappa=0.792,P=0.007)。随访结果显示,有1例ICC患者术后18个月KRAS G12D突变升高,与影像学检查确认的复发时间一致。结论建立了检测KRAS G12D、TP53C242S、IDH1 R132C突变的dPCR平台,可用于ICC患者的辅助诊断、疗效评估及术后动态监测。