摘要：该研究通过聚合酶链式反应(PCR)扩增克隆大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta(DE3)的焦磷酸酶(PPase)基因,采用无缝克隆技术构建焦磷酸酶表达载体pET-28a-ppa,并转化至感受态***(DE3),构建重组菌株*** PPa.采用单因素试验对其诱导表达条件进行优化,并进一步采用镍离子磁珠纯化重组PPas,研究其酶学性质。结果表明,成功构建重组菌株***,当异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导浓度、诱导温度和诱导时间分别为0.4 mmolL、20℃和8h时,重组PPase活性达到最高,为129.05 IU/mL,是优化前的3.14倍。重组PPase的理论分子质量为19.7kDa;最适反应温度和pH分别为55℃和9,在温度10~30℃及pH 7.0~9.0范围内稳定;金属离子K^(+)、Mg^(2+)和Na^(+)可极显著性提高该酶活性(P<0.01),而Mn^(2+)和Zn^(2+)对该酶有极显著抑制作用(P<0.01);重组PPase的动力学参数米氏常数(K_(m)值)为3.58 μmol/mL、最大反应速率(V_(max)值)为314.66μmol/(mL·min),催化常数(K_(cat)值)为87300.56S^(-1),半失活时间为10 min。该研究为后续工业化生产PPase及对该酶的理性设计提供依据。