摘要：目的研究脱氧核酶对Period1mRNA的体外切割作用,及注射脱氧核酶对阿片类药物奖赏效应的影响。方法设计合成针对Period1(Per1)mRNA的脱氧核酶(DRz164),并构建pcDNA3.1(+)-Per1164体外转录载体;将体外转录产物和脱氧核酶按一定条件混合,检测脱氧核酶的体外切割效率。脑室注射DRz164,建立小鼠条件位置偏爱模型,观察脱氧核酶对吗啡奖赏效应的影响。结果DRz164对Per1mRNA组分有切割作用,在反应30、60、90和120min的剪切百分率分别为36.4%、40.5%、47.8%和63%。给予DRz164后小鼠未能形成对吗啡的位置偏爱。结论DRz164在体外能够切割per1mRNA,在一定范围内剪切活性随时间延长而升高,小鼠脑室注射DRz164可拮抗吗啡所引起的奖赏效应,缓解对吗啡的精神依赖。

摘要：研究脱氧核酶对近日钟基因period1(per1)表达的影响,进而寻找治疗和近日节律有关疾病的基因疗法.设计合成针对per1的脱氧核酶DRz164,DRz256,并构建pcDNA3-per1164:256体外转录载体,将转录产物和脱氧核酶混合,在一定反应条件下进行体外切割反应,地高辛酶联免疫及酶催化显色法检测脱氧核酶的体外切割效率.将pcDNA3-per1和DRz164或DRz256在脂质体的介导下转染NIH3T3细胞,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、流式细胞术(FCM)检测脱氧核酶对近日基因表达的影响.于37℃孵育2h后,DRz164对底物的剪切百分率为63%,DRz256为50.5%.RT-PCR半定量检测per1mRNA表达水平明显下降,FCM结果显示细胞内Per1蛋白的合成受到抑制.脱氧核酶DRz164,DRz256体外具有定点切割近日钟基因per1mRNA组分的活性,使转染细胞per1mRNA和Per1蛋白表达下降.

摘要：目的研究节律基因Period1在药物精神依赖形成中的作用。方法设计针对节律基因Period1mR NA的核酶 (per1RZ) ,构建以真核表达质粒pcDNA 3.1为基础的per1RZ表达质粒 (pcDNA 3.1 per1RZ) ;体外转录切割实验检测核酶对Period1RNA的切割作用 ;脑室注射pcDNA 3.1 per1RZ ,调节动物节律基因Period1的表达 ;以BALB/C小鼠的吗啡条件性位置偏爱 (CPP)为指标 ,观察pcDNA 3.1 per1RZ对吗啡精神依赖形成的影响。结果体外切割实验发现per1RZ对Period1RNA的切割效率达到60 % ;动物实验证实per1RZ能有效干扰小鼠中枢神经系统Period1基因的表达 ,阻断吗啡条件性位置偏爱的形成。结论节律基因Period1与药物精神依赖的形成有关 。