摘要：为研究植物激素生长素在模式作物水稻中的功能,我们利用CRISPR-Cas9基因编辑技术,设计水稻生长素合成基因Os YUCCA1的两个靶位点,构建Os YUCCA1基因的敲除载体。通过对Os YUCCA1基因序列分析,将合成的靶点序列插入含hsp Cas9n的载体中,再与p CAMBIA1300重组,构建基因编辑载体,通过农杆菌介导的方法转化水稻品种9522。从78棵转基因苗中鉴定得到针对Os YUCCA1的3种突变类型,包括26棵在外显子第260号碱基处插入碱基A或T两种类型纯合突变和22棵在外显子第447号碱基处插入A、444号碱基C被T替换、445号碱基G被C替换的杂合突变类型。通过分析,发现3种突变株系都存在移码现象而使氨基酸提前终止致使基因突变。本研究成功利用CRISPR-Cas9基因编辑技术敲除了水稻Os YUCCA1基因,为进一步研究Os YUCCA1基因功能提供了理论参考依据。

摘要：为了研究生长素是如何参与调控植物的生长发育过程,我们利用CRISPR-Cas9基因编辑技术,设计水稻生长素响应因子OsARF8的两个靶点,对水稻中的该基因进行敲除。构建基因编辑载体pBIN-sg R-Cas-Os,通过农杆菌介导转化水稻品种‘9522’。我们从潮霉素抗性筛选出的28株转基因植株中鉴定得到针对OsARF8的一种杂合突变类型,共计6棵在外显子第174号碱基处缺失一个C碱基的杂合突变类型osarf8-1,该处碱基突变所对应的是第7个氨基酸的变化,导致亮氨酸(Leu)变成色氨酸(Trp),自此处开始随后的氨基酸序列发生移码突变,并且提前终止于第123个氨基酸,正好位于Os ARF蛋白的DBD功能域的最始端(DBD为120~222个氨基酸),说明DBD功能域在该突变体中完全不能表达,ARF8蛋白的功能将受到极大的影响。本研究成功利用CRISPR-Cas9基因编辑技术精确地敲除了水稻OsARF8基因,为CRISPR技术在水稻中的应用提供了一个可供参考的范例,同时也为进一步研究OsARF8基因功能提供了重要的参考依据。

摘要：背景在5G+区块链建立的转出医院、医疗急救中心和接诊医院三位一体的危重新生儿急救转诊网络体系中,实现“上车即入院”,提升危重新生儿转运(NT)质量。目的构建多场景NT给药方案标准化知识库,开发多场景NT给药临床决策支持系统。设计质量改进研究。方法检索急危重NT途中给药管理的指南或共识,提取不同转运场景下药物应用证据,并通过专家共识构建NT给药知识库,基于决策支持系统帮助转运医生规范用药,分析其运行前(对照组)后(干预组)在上海市内NT药物使用情况。主要结局指标NT用药次数和种类。结果中英文数据库和其他资源系统共检索到149篇文献,去重、初筛和全文筛选后纳入了1篇专家共识,同时增加权威专著3部作为证据来源进入不同场景NT药物使用知识库的提取,共识专家组细化了低血糖场景设置(分为症状型和非症状型),对12种药物的推荐方案做了细化,NT不同场景药物使用知识库确定了16种药物。对照组30例,干预组61例,两组患儿性别、病种、胎龄差异均无统计学意义(P>0.05),出生体重差异有统计学意义(P=0.02)。对照组NT中使用了33次4种药物,干预组NT中使用了88次11种药物,其中由决策支持系统智能识别后触发弹窗提醒使用74次(85.9%),由医生主观判断选择场景后触发使用14次(14.1%)。干预组用药种类覆盖了对照组,对照组人均使用药物次数比为1.1(33/30),较干预组[1.4(88/61)]差异有统计学意义(P=0.041);对照组人均使用药物种类占比为25%(4/16),较干预组[62.5%(11/16)]差异有统计学意义(P=0.013)。结论构建的NT给药知识库及决策支持系统促进了NT中的规范用药和积极用药。