摘要：目的 建立TAFA2基因剔除小鼠模型,为在体研究TAFA2基因的生物学功能及其与中枢神经系统发生、发育的关系创造条件. 方法 运用生物信息学手段确定小鼠TAFA2基因组的序列,设计基因剔除策略,构建基因剔除载体pBR322-MK-MCS-TAFA2,以电穿孔方法将基因剔除载体导入ES细胞,用G418和Ganciclovoir进行正负筛选,获得双抗性克隆,PCR鉴定出正确同源重组的ES细胞克隆. 结果 同源重组的ES细胞注入小鼠囊胚后获得嵌合体小鼠,嵌合体小鼠与C57BL/6J小鼠交配后获得Aguoti（野生型）毛色的小鼠41只,其中14只为TAFA2基因剔除杂合子小鼠,阳性率为34.1%.在雌、雄杂合子小鼠交配的后代中获得纯合子小鼠,初步的表型观察未发现TAFA2基因剔除小鼠出现异常改变. 结论 已成功建立了TAFA2基因剔除小鼠模型,其中纯合子小鼠未出现胚胎致死现象.

摘要：目的:克隆绝缘子元件并验证其绝缘功能,为转基因载体的构建提供条件。方法:以GenBank提供的绝缘子序列设计引物,应用PCR方法,从鸡的基因组序列中克隆绝缘子,酶切、测序鉴定;将绝缘子亚克隆至表达载体pEGFP-N2,体外扩增纯化后瞬时转染COS7细胞,72h后收获细胞,荧光显微镜下观察EGFP表达情况。结果:绝缘子元件成功克隆,酶切、测序鉴定序列正确;体外试验证实,亚克隆有绝缘子的载体与对照组比较,EGFP表达水平显著降低。结论:绝缘子元件成功克隆,且在体外具有绝缘功能,能够与目的基因共同构建转基因载体,从而提高转基因的表达效率。

摘要：目的建立N-乙酰天冬氨酰谷氨酸(NAAG)肽酶基因剔除小鼠模型,为在体研究NAAG肽酶基因的生物学功能并揭示其在脑损伤后继发性脑损害进程中的所起的作用创造条件。方法根据小鼠NAAG肽酶基因组的序列,设计基因剔除策略,构建基因剔除载体NAAG-KO-pBR322,以电穿孔方法将基因剔除载体导入胚胎干细胞(ES),应用G418和更昔洛韦进行正负筛选,获得双抗性克隆,聚合酶链式反应(PCR)鉴定并测序获得正确同源重组的ES细胞克隆。结果同源重组的ES细胞注入小鼠囊胚后获得11只嵌合率>50%嵌合体雄性小鼠,嵌合体小鼠与C57 BL/6J雌鼠交配后获得11只杂合子小鼠,其中雄性7只,雌性4只。在雌、雄杂合子小鼠交配的后代中获得7只纯合子小鼠,PCR鉴定其基因型,逆转录PCR(RT-PCR)提示该基因鼠未表达NAAG肽酶。结论我们成功建立了NAAG肽酶基因剔除小鼠模型,其中纯合子小鼠未出现胚胎致死现象;初步的表型观察未发现NAAG肽酶基因剔除小鼠出现异常改变。