摘要：应用Chelex-100快速提取动物基因组DNA的方法,并根据羊线粒体基因的核苷酸序列设计1对引物,通过对分离的DNA进行PCR扩增、基因克隆及核苷酸序列分析,实现了对动物源性饲料中羊组织成分的检测.结果显示,该方法对羊组织DNA检测的敏感性可达20.16 pgμ/L,当肉骨粉样品中含有质量分数为0.050%的羊源性成分时仍能检出,整个过程约需3 h.

摘要：根据已发表的基因序列设计了 1对PCR引物 ,以伪狂犬病病毒Ea株 (pseudorabiesvirusEa ,PRVEa)基因组DNA为模板 ,扩增出一大小为 5 11bp的片段。通过酶切和测序证实 ,该基因为伪狂犬病病毒Ea株的又一糖蛋白基因 ,即gL基因。Blast软件分析表明 ,该基因与Kaplan株核苷酸序列的同源性为 94% ,氨基酸序列的同源性为 95 %。将测序结果输入GenBank ,获得登录号AF44 845 6。

摘要：根据GenBank发布的猪2型圆环病毒(PCV2 )序列(AY0 35 82 0 ) ,设计两对特异性引物,采用PCR方法,分别扩增了猪2型圆环病毒ORF1和ORF2基因。将ORF1和ORF2基因的PCR产物回收并酶切后,依次插入到伪狂犬病毒gE gI双缺失通用转移载体pIECMV中,构建了猪2型圆环病毒_伪狂犬病毒重组中间转移质粒pIEORF1_ORF2。采用脂质体介导法,将重组中间转移质粒pIEORF1_ORF2与伪狂犬病毒TK- gE- LacZ+ 基因组共转染IBRS_2细胞,待发生细胞病变后收集病毒液进行空斑纯化,利用检测PCV2ORF1基因和ORF2基因的PCR方法筛选重组病毒TK- gE- gI- ORF1-ORF2 + ,用Southernblotting鉴定重组病毒,并用Westernblotting检测ORF1_ORF2融合蛋白的表达情况,在此基础上也测定了重组病毒在不同细胞上的增殖滴度。结果表明,外源基因ORF1和ORF2已成功插入到TK- gE- LacZ+ 亲本株的基因组中,并获得了表达,表达的蛋白可与PCV2阳性血清发生反应。同时发现ORF1和ORF2基因的插入不影响重组病毒的增殖特性,其毒力与亲本株相当。

摘要：本试验通过自行设计两段引物,利用重叠延伸PCR方法,将伪狂犬病病毒(PRV)gB基因两段优势抗原表位序列串联,克隆至pMD18-T载体,测序正确后双酶切连接至pET-32a(+)载体,构建重组质粒;重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)受体菌,经IPTG诱导后,通过SDS-PAGE和Western blotting检测融合蛋白表达情况。经检测,诱导后的重组蛋白获得表达,重组蛋白大小约为54ku,其中串联蛋白大小约为34ku。该重组蛋白可与伪狂犬病病毒gB蛋白单克隆抗体发生特异性反应,表明重组蛋白的抗原性良好。

摘要：设计合成一对扩增猪Ⅱ型圆环病毒 (PCV 2 )全基因组的特异性引物 ,从 3份患断奶后仔猪多系统衰弱综合征 (PMWS)的死亡仔猪病料中 ,PCR扩增和克隆了 3株PCV 2全基因组序列。将所测序列与已公布的PCV毒株序列进行同源性比较 ,并绘制系统发育进化树。结果显示 ,所测毒株间的核苷酸同源性为 95 7%～ 99 4 % ,与其它毒株的同源性较高 ,达 95 1%以上 ;ORF1的核苷酸同源性高达 97 8%以上 ,氨基酸同源性大于 98% ;ORF2的核苷酸同源性较低 ,为 90 %～ 98%不等 ,推导的氨基酸序列同源性介于 87%～ 99 1%。进化树分析表明各分离毒株在进化上存在地域上的相关性。将克隆到的PCV 2基因组环化后 ,脂质体介导转染PK 15细胞 ,盲传 3代。间接免疫荧光检测表明 ,克隆到的基因组具有感染性。

摘要：根据GenBank中猪2型圆环病毒(PCV2)序列(AY035820),设计1对引物,并以包含PCV2全基因组的重组质粒pT-PCV为模板,扩增出含ORF2全基因的片段(709bp),回收PCR产物,将其克隆入pMD18-T载体,获得重组质粒pTORF2,并对其进行序列测定。重组质粒经Bal 和Sal 双酶切,回收ORF2基因,将其插入pGEX-KG的Sma 和Sal 位点间,构建原核表达质粒pGEXORF2,阳性重组质粒转化***21(DE3),进行原核表达。用此表达产物包被酶标板,建立ELISA诊断方法,并对临床676份送检血清进行了检测,结果表明其总阳性率为62.7%(424/676),仔猪阳性率为38.9%(74/190),肥猪阳性率为63.2%(84/133),母猪阳性率为74.6%(249/334),公猪阳性率为89.5%(17/19)。

摘要：为了研究伪狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）立即早期180基因（immediate early 180，IE180）及其功能，试验采用设计的特异性引物通过PCR法对IE180基因进行扩增，并成功构建了IE180克隆载体，经序列测定后，用DNAStar软件对该序列和已发表的7个PRV参考株的IE180基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行比对分析。结果表明，HB-98株IE180基因编码区大小为4425 bp，编码1474个氨基酸，与GenBank中登录的参考株的IE180基因核苷酸同源性为98.4%～99.1%,氨基酸同源性为97.8%～98.4%。系统进化树分析结果表明，该毒株与毒株TNL（登录号：AF352564.2）的亲缘关系较近。

摘要：根据GenBank中注册的O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1和3ABC基因序列,设计了2对引物.采用RT-PCR方法从FMDV分离株O/HK/2001扩增得到VP1和3ABC基因.经对它们的核苷酸序列测序和同源性比较,显示与14株O型FMDV参考毒株中的O/HKN/2002同源性最高(分别为98.3%和98.6%),并且在VP1决定各种亚型FM-DV免疫原性的主要抗原决定族的144、148、154和208位关键氨基酸,比对均未发现变异.通过酶切将VP1和3ABC基因分别亚克隆到4个表达载体pET-30a、pPROEX HTb、pQE30和pQE9中构成重组表达质粒,利用IPTG诱导表达,经SDS电泳分析表明这些重组质粒在相应表达宿主菌BL21、DH5α和M15中,除pQE30-3ABC和pQE9-3ABC外均获得了表达,其中pET-30a和pPROEX HTb载体表达量较高.

摘要：设计性和开放式的实验教学模式是各农业高校在建立独立的实验教学体系改革中的一种探索。为了满足高素质兽医人才的培养需求,本文在整合和优化兽医微生物学与免疫学实验内容的基础上,对如何改变验证性的传统教学模式,构建研究设计性综合实验教学体系进行了探讨。