摘要：目的建立基孔肯雅病毒的荧光定量PCR检测方法。方法针对基孔肯雅病毒的基因序列,设计、合成引物、探针及反应体系,摸索出最佳反应条件,建立TaqMan荧光探针法和SYBR荧光染料法。利用建立的方法对30例基孔肯雅热病标本和10份基孔肯雅病毒保存液进行扩增、检测和结果分析,并与常规RT-PCR方法的检测结果进行比对。结果实时荧光定量PCR法比常规RT-PCR法快速、灵敏。40份标本TaqMan荧光探针法、SYBR荧光染料法和常规RT-PCR方法的阳性率分别为:17.5%、17.5%、15%。统计分析表明,3种方法差异不具有统计学意义。结论实时荧光定量PCR方法快速且具有较好的特异性、敏感性、重复性,适用于基孔肯雅病毒的快速检验。

摘要：目的:建立一种能同时检测细菌性感染性腹泻标本中沙门菌、志贺菌、金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌的多重聚合酶链反应(PCR)检测方法。方法:根据沙门菌的invA基因序列、志贺菌的ipaH基因序列、金黄色葡萄球菌的nuc基因序列、副溶血性弧菌的tdh基因序列设计特异性引物,通过多重PCR反应对样品中上述4种病原茵的目标基因进行扩增,同时优化反应体系。结果:本方法的特异性和灵敏性良好,该方法能检测的灵敏度分别为103.56pg的沙门菌DNA,94.85pg的志贺菌DNA,14.1pg的金黄色葡萄球菌DNA,115.32pg的副溶血性弧菌DNA。结论:该方法特异性和灵敏度高,检测周期短,适用于细菌性感染性腹泻标本中多种致病菌的快速检测,具有较好的应用前景。

摘要：目的利用RT-PCR技术,建立并优化快速、敏感、特异的检测新型甲型H1N1流感病毒的方法,并进行初步应用。方法设计高度特异性引物,优化常规RT-PCR和Real-time Fluores-cent Quantitative PCR反应体系,并对2009年惠州市流感样病例咽拭子标本进行甲型H1N1流感病毒RNA的检测。结果荧光定量RT-PCR与常规RT-PCR方法均有较高的特异性,与季节性H1N1、H3N2和B型流感病毒等无交叉反应,两种PCR检测结果的一致率达到99.5%以上,均能快速准确检测出患者咽拭子标本的甲型H1N1流感病毒,且荧光定量RT-PCR最低模板检测限在0.5pg以下。结论常规RT-PCR和荧光定量RT-PCR不仅特异性高,而且比病毒分离法更敏感、简便和快速,适合甲型H1N1流感病毒的快速检测,为早期诊断、定量分析甲型H1N1流感病毒感染程度奠定基础。