摘要：为了规避大肠杆菌( Escherichia coli )自身基因组表达的天然GAD的干扰,以再生无定形纤维素(regenerated amorphous cellulose,RAC)特异性吸附纤维素结合结构域谷氨酸脱羧酶(cellulose-binding domain-glutamate decarboxylase,CBD-GAD)制备的RAC-CBD-GAD固定化酶作为评价指标,采用单因素和田口试验设计法对 E. coli GDMCC60445高效表达CBD-GAD的条件进行了优化。结果表明, E. coli GDMCC60445表达CBD-GAD的适宜培养基为改良LB (Luria-Bertani)培养基,其组成为胰蛋白胨8 g/L、酵母膏 6 g/L、NaCl 10 g/L 、pH 5.5;适宜的培养条件为温度37 ℃、摇床转速120 r/min、培养时间24 h。在该适宜条件下,RAC-CBD-GAD活力为(419.79±10.37) U/g,与田口法预测值一致,较优化前提高了(30.28±3.22)%。