摘要：为定量检测现场样品中东海原甲藻的细胞色素b(cytochromeb,Cytb)基因,本研究设计了该基因的特异性引物,并对现场样品反转录反应体系中加入的模板数量和定量PCR反应条件进行了优化.结果表明:设计的引物具有较好的特异性,可有效区分不同的藻类;针对现场样品,在20μL的反转录体系中,适宜加入的RNA模板的量为50～200ng;PCR模板稀释10倍或向定量PCR反应体系中加入终浓度为0.2μg·μL-1的牛血清蛋白(BSA)均能有效降低现场样品中抑制物的抑制作用,减小干扰.该方法的建立对从分子水平探讨东海原甲藻暴发和消亡的内在机制具有重要意义.

摘要：以双特异分子探针技术(NPA-SH)为基础,运用电致化学发光技术(ECL)和磁性微球分选技术对其进行改进,成功建立了用于赤潮藻类定性定量分析的电致化学发光分子探针(ECL-MP)检测新技术.设计微小原甲藻特异性NPA探针并对其进行联吡啶钌和生物素标记,优化磁性微球使用量,在ECL检测装置中启动电化学反应,建立光信号与微小原甲藻细胞数目间的ECL-MP分析曲线并对其进行验证.结果表明,标记后的NPA探针具有一定的特异性和实用性;4μg是检测20μL目标藻杂交混合液的最适磁性微球使用量;在最适条件下,微小原甲藻细胞数的线性分析范围6.25×102～4×104个;比较ECL-MP和显微计数方法的样品检测结果,在95%置信区间内二者无显著差异(t-检验).ECL-MP方法为实现微小原甲藻现场样品的快速准确检测提供了一种新方法.

摘要：以我国近海海域常见的海月水母为目标生物,提取其水母基因组DNA,PCR扩增mt-16SrDNA(650bp)和mt-COI基因(709bp)的部分序列,经纯化、克隆、测序后,将获得的序列进行BLASTn分析,筛选目的序列中与其他水母差异较大的区域,设计出8对分别针对海月水母mt-16SrDNA和mt-COI基因序列的特异性引物.经过实验室培养样品和模拟现场样品检测发现,针对mt-16SrDNA的引物AS3和mt-COI的引物AC3具有较好的特异性,可以从海蜇、沙海蜇、霞水母、端鞭水母和海月水母中快捷地检测出目标水母,从而初步建立了海月水母的分子生物学鉴定方法和检测技术.本技术摆脱了水母形态学鉴定方法存在的局限,可准确、快速地对样品进行定性分析.

摘要：建立了检测东海原甲藻线粒体细胞色素b(Cytb)基因mRNA含量的实时荧光定量PCR方法。以甲藻Cytb基因的简并引物扩增得到984 bp长的东海原甲藻Cytb基因片段,经克隆、测序,制备并纯化质粒。以光度法测定质粒浓度并作为标准品。对上述基因片段,利用PRIMER EXPRESS 3.0设计引物,以梯度稀释的质粒标准品进行定量PCR反应,以SYBR Green I为荧光染料,制作标准曲线,得到基因拷贝数X与Ct值的关系为:Ct=-3.50 lgX+39.35(相关系数r为0.999)。通过对不同生长时期的东海原甲藻样品的Cytb基因mRNA含量检测,发现该基因的表达量较稳定,平均值为(45.4±4.7)拷贝/细胞,受生长状态影响不大,可作为实时荧光定量PCR的内参基因。

摘要：设计了一套圆海链藻(Thalassiosira rotula)特异性探针,运用双特异分子探针技术,对圆海链藻(Thalassiosira rotula)进行了定性定量检测。结果表明,本实验中设计的一套探针与其它十几种藻无交叉反应,具有种特异性;细胞裂解液直接杂交检测优于提纯RNA样品检测;对自然样品做了初步检测,发现天然海水中的其它浮游生物对该检测方法影响很小。

摘要：针对微型原甲藻核糖体大亚基和小亚基RNA分别设计了大亚基探针(LSU probe)和小亚基探针(SSU probe),发展了对微型原甲藻进行定性和定量分析的双特异探针技术.分析数据表明针对微型原甲藻核糖体大亚基RNA的LSU probe能够特异地将微型原甲藻和其他7种微藻分开,而且检测信号的强弱在一定的范围内与细胞数呈线性关系;由于针对微型原甲藻核糖体小亚基的SSU probe探针由于与具齿原甲藻存在核酸序列一致性,该探针与具齿原甲藻有严重的交叉反应,但未发现与海洋原甲藻和其他藻的交叉反应.另外,研究还优化了破碎微型原甲藻细胞所需的超声时间以及获得探针的特异性所需的S1酶反应温度.本研究为实现对微型原甲藻海水样品的快速准确监测奠定了基础.

摘要：培养学生的实践能力是大学教育的重要目标之一。本文根据环境监测课程的特点,结合教学实践,总结了通过教学理念、内容和方法加强课程实践性的改革探索。在教学中强化实践教学理念,提倡理论与实践并重,培养学生的参与意识;及时充实新理论、新方法,采用现代化手段开展教学;结合授课内容,增加课堂讨论等实践环节;此外,积极鼓励学生自主设计监测方案并进行答辩,同时在教学过程中还需要增加多种形式的实践单元。

摘要：目的通过体外实验,在细胞水平探讨六价铬[Cr(Ⅵ)]诱导的L-02肝细胞氧化应激状态及microRNA谱系的改变。方法实验中设计不同的Cr(Ⅵ)浓度梯度,选择不同的时间点进行观察,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测L-02肝细胞活力,用荧光探针DCFH-DA观察L-02肝细胞氧化应激状态,用实时定量PCR技术检测L-02肝细胞中多个毒物特异性microRNA表达。结果MTT实验显示5μmol/L浓度的Cr(Ⅵ)是L-02肝细胞70%存活的临界值,在各时间点细胞的存活率分别为84.15%、81.44%、74.25%和68.04%。5μmol/L浓度的Cr(Ⅵ)处理L-02肝细胞8 h可诱发最强的氧化应激状态,ROS相对荧光值达169.2%。在氧化应激最高点检测到的microRNA改变是:miR-370、miR-let-7和miR-125b表达上调,miR-122和miR-137表达下调,miR-298和miR-153表达差异无统计学意义。结论金属毒物Cr(Ⅵ)可诱导L-02肝细胞氧化应激状态,并出现特征性的microRNA表达谱。

摘要：从实际工程项目建设流程入手,探讨了工程项目造价控制方法,分别阐述了设计、招投标、工程实施及竣工阶段的造价控制要点及具体措施,指出造价控制应着眼于项目建设的各个阶段,各个环节,并采用科学合理的方法。