摘要：基因特异性敲除的细胞常用于生物学研究。近些年兴起的CRISPR-Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-Cas9 nuclease)基因编辑技术越来越广泛地用于基因特异性敲除的实验中。本实验通过利用CRISPR-Cas9基因编辑技术,实现对大鼠心肌H9c2细胞Tudor-SN(tudor staphylococcal nuclease)基因的敲除,并观察其对H9c2细胞周期及增殖的影响。选择PX462质粒为载体,利用软件设计能特异性识别H9c2细胞Tudor-SN基因第2个外显子的上下游sgRNA(single-guided RNA),构建1对重组质粒。随后,将这对质粒共同转入H9c2细胞中,再挑选阳性单克隆细胞进行培养。Western印迹鉴定其敲除效果,并用敲除成功的细胞株通过流式细胞术及CCK-8(cell counting kit 8)实验进行细胞周期和增殖的检测。Western印迹结果显示,在阳性细胞中,Tudor-SN蛋白不表达,成功实现了对Tudor-SN基因的敲除。流式结果显示,Tudor-SN基因敲除(KO)细胞发生了G1期阻滞。G1期细胞占比由H9c2野生型(WT)细胞的54.28%±0.21%升高到KO细胞的61.96%±0.40%(*P<0.05)。CCK-8实验结果显示,KO细胞的增殖速率减慢。生长第6天的A值由WT细胞的2.82±0.03降低到KO细胞1.85±0.19(*P<0.05)。本实验成功构建了H9c2细胞Tudor-SN基因敲除细胞株,并检测到Tudor-SN基因敲除对细胞周期的阻滞及增殖的抑制,为研究Tudor-SN基因对心肌细胞功能的调控提供了便利的工具及研究的基础。

摘要：针对当今城市建设中井盖排水不畅、易倾斜、有害气体监测不足、人工巡检管理不及时等安全隐患问题,设计了一款集实况监测与响应、状态数据采集于一体的智能井盖。以合泰单片机为控制芯片,通过各传感器模块采集路面积水数据、井下气体浓度数据及井盖姿态数据,数据实时上传到云平台并处理。测试结果表明:该智能井盖具有工作响应快、数据采集传输稳定、可实时监控等特点,提高了井盖管理维护人员的工作效率,使得城市更智能化。

摘要：针对牵引车后桥挡泥板支架安装位置处车架撕裂问题,设计了一种橡胶涂层复合结构减振挡泥板支架,并通过ANSYS有限元分析,对橡胶涂层复合结构减振挡泥板支架及普通挡泥板支架的振动特性进行了有限元分析和对比,得到橡胶涂层复合结构减振挡泥板支架较普通挡泥板支架的振动幅值降低,振动特性得到改善,对车架的破坏作用减弱。