摘要：转录因子Tbx3(T-box3)在调控动物个体的正常发育中扮演重要角色。本研究克隆水牛(Bubalus bubalis)Tbx3基因,对其进行生物信息学分析,并检测其在水牛不同发育阶段早期胚胎、不同类型细胞以及不同组织的表达情况,初步探讨Tbx3在水牛胚胎发育过程中的作用。根据GenBank上已登录的牛(Bos taurus)、山羊(Capra hircus)等物种的Tbx3基因序列设计特异性引物,利用RT-PCR技术和T-A克隆技术克隆水牛Tbx3基因,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测、分析水牛Tbx3基因的表达谱。结果显示,克隆获得的水牛Tbx3基因长度为3291 bp,包含了编码728个氨基酸的编码区及其5′端1 kb非编码区片段。水牛Tbx3基因与牛、绵羊(Ovis aries)、猪(Susscrofa domestica)、黑猩猩(Pan troglodytes)、小鼠(Mus musculu)Tbx3基因的相似性分别为97%、98%、90%、88%和85%,且在不同物种间高度保守,符合生物进化规律。蛋白质结构预测分析软件提示,Tbx3蛋白包含59.48%无规则卷曲、32.28%α-螺旋、8.24%伸展串,为亲水不稳定的碱性蛋白。RT-qPCR结果显示Tbx3在水牛早期胚胎的四细胞、八细胞期不表达,在二细胞期、桑椹胚期少量表达,在囊胚期表达量最高;在水牛颗粒细胞中不表达,在胎儿成纤维细胞、骨髓间充质干细胞中有少量表达,在类胚胎干细胞中表达量最高;Tbx3在水牛卵巢、心脏、睾丸、脑、胚胎生殖嵴中少量表达,脾脏、肝脏表达更高,肾脏、肌肉中表达量最高。本研究发现水牛Tbx3基因的表达具有时空特异性,提示其在水牛早期胚胎细胞谱系分化中起重要作用,但具体作用机制尚需进一步研究阐明。