摘要：为了全面了解犬冠状病毒(CCoV)分离毒株JS1706和JS1712基因组3′端主要结构蛋白基因和非结构蛋白基因的分子特征,本研究设计了8组引物进行RT-PCR扩增,产物经测序和拼接后,获得了约8.7 kb基因组片段,该基因组结构及其编码蛋白顺序为5′-S-3abc-E-M-N-7ab-3′。对CCoV JS1706、JS1712株8.7 kb基因组核苷酸序列与α冠状病毒属参考毒株的相同区域核苷酸序列进行比对,结果表明,2个分离株与CCoVⅡ型参考毒株相似性最高(83.4%~93.1%),其次为FCoVⅡ型参考毒株(87.1%~87.9%)、TGEV参考毒株(86.1%~86.8%)、CCoVⅠ型参考毒株(72.0%~72.1%)和FCoVⅠ型参考毒株(67.5%~69.9%)。JS1706、JS1712毒株与同属冠状病毒参考株的结构蛋白S、E、M和N蛋白氨基酸相似性分别为46.4%~95.2%、75.6%~100%、82.8%~99.2%和78.5%~99.7%。说明同属内冠状病毒的S基因变异度大,E、M、N基因相对保守。根据基因组3′端8.7 kb核苷酸序列和S蛋白氨基酸序列相似性比对结果,JS1706和JS1712毒株均与泛嗜型原型株CB/05相似性最高,分别为93.0%~93.1%、94.8%~95.2%,其他结构蛋白包括E、M和N氨基酸序列比对也发现与CB/05株的相似性较高,分别为97.6%~100%、92.4%~93.1%和97.9%。S蛋白氨基酸序列的进一步分析表明,JS1706和JS1712毒株的S蛋白N端有一些特有氨基酸,S蛋白氨基酸序列中没有明显的S1/S2蛋白酶切位点(RRARR),但在958—963位氨基酸有S2′裂解位点特征基序(KRKYRS)。基于S蛋白氨基酸序列构建的系统发育进化树分析显示,CCoV JS1706和JS1712株与CCoVⅡa亚型参考毒株和FCoVⅡ型参考毒株聚集形成一个分枝。CCoV JS1706和JS1712株非结构蛋白的编码基因ORF3abc和ORF7,其结构、大小与经典疫苗株INSAVC-1相似,无明显插入、缺失和移码突变。本研究有助于深入了解国内CCoV流行毒株的分子特性,为后续分子流行病学调查、诊断试剂和疫苗研发奠定了基础。

摘要：根据鸡毒支原体(MG)和滑液囊支原体(MS)的16SrRNA基因序列,设计并合成了探针MG和MS共同目的基因,跨幅为580bp的一对引物。用这对引物对2个标准的MG和1个标准的MS菌株DNA模板进行聚合酶链反应(PCR),结果得到了预期大小约580bp的PCR产物。回收纯化琼脂糖电泳凝胶中的MG扩增产物克隆至T载体中,DIG随机引物法合成核酸探针,斑点杂交试验对MG和MS均呈阳性,检测灵敏度分别为2ng和3ng,其它对照菌(毒)株为阴性。

摘要：本文在分析传统的油乳剂灭活疫苗生产工艺流程和控制点的基础上,结合自身公司GMP厂房设计、产品流程、设施配制、工艺改进等内容,全面概括了油乳剂灭活疫苗现代生产系统,且设备与工艺的运行良好,生产出了合格产品。证明GMP生产的合理性、实用性。

摘要：根据禽霉形体 16SrRNA的基因序列设计、合成了 1对引物 ,用这对引物对鸡毒霉形体 (Mycoplasmagallisep ticum ,MG)和鸡滑液囊霉形体 (Mycoplasmasynoviae ,MS)菌株DNA进行PCR扩增 ,得到了与预期大小相一致的约 5 80bp的PCR产物 ,而这对引物对其他禽病病原DNA或RNA模板的扩增结果为阴性。PCR方法对MG和MS的最小检出量分别为 2 pg和 3pg。应用已建立的PCR方法检测MG人工感染样品和临床样品 ,从人工感染样品中均检测到MG ,临床样品的MG阳性检出率为 10 .2 5 % 。

摘要：根据已发表序列设计一对包含鸡传染性喉气管炎病毒 ( ILTV) TK基因全长核苷酸的 1 2 5 9bp引物 ,对 2株 IL TV强毒和1株 ILTV疫苗毒进行 PCR扩增 ,均能扩增出预期大小的目的片段 ,酶切分析证实了目的片段的特异性 ,而其它禽病原体的扩增均为阴性。 PCR检测 IL TV DNA的最小检测量为 75 pg。此方法检测人工接种鸡的气管棉拭样品 ,均能检测到 IL TV。