摘要：根据Gen Bank中猪链球菌(Streptococcus suis,Ss)2、7、9血清型的荚膜多糖基因簇中的斜基因序列,分别设计3对引物,在完成最佳条件筛选、特异性、敏感性试验的基础上,建立了一种快速区分猪链球菌2、7、9三种血清型的多重PCR检测方法,并对我国广东省分离鉴定的猪链球菌进行分型鉴定。结果表明,建立的多重PCR检测方法分别对猪链球菌血清2型、7型和9型扩增出特异性片段,片段大小分别是360、600、800 bp。该方法特异性良好,与副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)、多杀性巴氏杆菌(Pasteurellamultocida,Pm)、波氏杆菌(Brodetella bronchiseptica,Bb)、沙门氏菌(Salmonella,Sal)、大肠杆菌(Escherichia coli,***)以及猪链球菌其他29个血清型均无交叉反应。用建立的多重PCR方法对临床分离的341株猪链球菌菌株进行血清型分型鉴定,并与传统的血清凝集分型结果进行比较,二者符合率为97.36%。与传统的血清凝集方法相比,本研究建立的PCR方法具有快速、灵敏、特异等特点,可应用于实验室的快速诊断以及猪链球菌的流行病学调查。

摘要：本研究根据GenBank登录的猪瘟病毒Shimen和C株的E2基因序列设计1对特异引物,采集来自贵州的疑似猪瘟病死猪组织,提取总RNA,进行RT-PCR扩增,将扩增产物测序后进行核苷酸序列比较分析。并将RT-PCR产物克隆到pMD18-T载体上,构建重组质粒pMD18-T-E2,经双酶切鉴定、核苷酸序列分析后,将E2基因亚克隆到pET-32a(+)原核表达载体上,成功构建猪瘟病毒E2基因原核表达质粒pET-32a-E2,将构建好的原核表达质粒pET-32a-E2转化至宿主菌BL21中,诱导表达目的蛋白,表达产物经SDS-PAGE电泳、Western blot分析,得到了约58ku的条带,与预期大小相符,进一步提取、纯化目的蛋白,将目的蛋白加入弗氏佐剂免疫小鼠,免疫后采血检测抗体,结果显示目的蛋白能诱导小鼠产生一定抗体水平,该研究为猪瘟亚单位疫苗的研究奠定了基础。

摘要：为了研究猪圆环病毒(PCV)的分子生物学诊断技术和基因工程疫苗,试验根据GenBank公布的PCV ORF2基因的核苷酸序列设计1对特异性引物,从贵州省某猪场的疑似猪圆环病毒组织病料中提取DNA,采用PCR技术扩增PCV ORF2基因,克隆到pMD19-T载体并测序,将构建好的T载体双酶切,回收目的片段与pET-32a(+)载体及pcDNA3.1(+)载体连接并转化入TOP10中构建原核、真核表达载体,并将ORF2基因插到重组质粒pcDNA3.1-IL-2上,构建以IL-2融合表达真核载体。结果表明:克隆的PCV ORF2基因全长为719 bp,ORF为702 bp,编码233个氨基酸,与Gen-Bank公布的PCV ORF2基因的核苷酸同源性为98.4%。说明试验成功克隆了猪圆环病毒贵州地方毒株ORF2基因,并成功构建了PCV ORF2原核、真核表达载体及以IL-2融合表达真核载体。

摘要：根据GenBank中犬瘟热病毒Onderstepoort株序列设计特异性引物,以犬瘟热病毒贵州分离株（CDV-GZ1）RNA为模板,应用RT-PCR对病毒H蛋白编码基因进行了扩增、克隆及序列分析。测序结果表明,CDV-GZ1 H基因ORF由1 824 bp组成,可编码607个氨基酸;与已发表23株其它CDV H基因核苷酸序列相似性在91.1%~99.6%之间,推导氨基酸序列同源性在91.0%~99.2%之间。GZ1株H蛋白含有5个潜在的N-联糖基化位点,与其他毒株相比,N-联糖基化位点的数目与位置均存在差异。系统进化树分析表明,CDV-GZ1株与德国Snyder Hill株和国内广州分离株（GZ0802）具有较高的同源性,推测这些毒株间可能具有更近的亲缘关系。

摘要：根据GenBank中发表的犬瘟热病毒Onderstepoort株N蛋白基因序列设计两对特异性引物,采用RT-PCR扩增犬瘟热病毒贵州分离株(CDV-GZ1)的N基因,并进行克隆与序列分析。结果显示,CDV-GZ1株N基因的ORF全长1572bp,其编码氨基酸序列与国外Shuskiy株和01-2689株的同源性分别为98.9%和97.1%,与部分国内分离株同源性在95%以上,说明N蛋白是保守性较强的结构蛋白。

摘要：为了研究伪狂犬病毒gE蛋白的结构及其在免疫保护中的功能,试验根据GenBank中猪伪狂犬病毒(PRV)GDSH株(登录号为EF552427)gE全基因序列设计引物,对伪狂犬病病毒gE基因进行PCR扩增、克隆及生物信息学分析。结果表明:PCR扩增基因全长1 734 bp,编码577个氨基酸,与Yangsan株对应序列同源性为99.4%,测序结果已提交GenBank,登录号为JX417716;Guizhou-DY株gE蛋白是一种不稳定的疏水性蛋白,柔性区域呈散在性分布,以T转角和无规则卷曲为主,具有2个疏水区,在100～400位氨基酸残基处抗原性指标较高,基因序列保守性强;经预测,gE全基因不能在大肠杆菌表达系统中得到高效表达。

摘要：为了研究猪伪狂犬病毒(PRV)gE基因主要抗原表位区是否可以进行原核表达,试验根据GenBank中发表的PRV GDSH株(EF552427)和Guizhou-DY株(JX417716)的基因序列,设计1对特异性引物,采用PCR扩增Guizhou-DY株gE基因主要抗原表位区,并进行克隆与序列分析。结果表明:Guizhou-DY株gE基因主要抗原表位区全长为636 bp,与韩国Yangsan株和国内GDSH株核苷酸同源性较高,分别为99.4%和99.2%;与韩国Yangsan株和国内GDSH株、HNJZ株氨基酸同源性较高,均为98.6%。说明该分离株与韩国Yangsan株和国内GDSH株具有较近的亲缘关系。

摘要：根据GenBank登录的猪细小病毒NADL-2株和China株序列,利用Oligo 6.0软件设计1对扩增NS1全基因的特异性引物,对从贵州省安顺地区检测到的PPV的NS1基因进行扩增、克隆、测序、序列分析和蛋白质结构预测分析。测序结果表明,扩增的目的基因长度为1986bp,共编码659个氨基酸,其中NS1基因的1287、1288和1298位碱基发生了缺失,导致429、430和433位氨基酸发生缺失。系统发生树结果表明,本试验测序的NS1基因与NADL-2弱毒株处在同一进化分支;氨基酸同源性与NADL-2弱毒株和Kresse毒株最高,均为98.6%。蛋白质结构预测分析结果表明,非结构蛋白NS1的分子质量为75269.76u,理论等电点pI为7.25,不稳定系数为41.57,推测其为不稳定蛋白质;脂肪指数为73.58,总体平均亲水性为-0.565,推测该蛋白质是一种亲水性蛋白质;该蛋白质含有丰富的α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规则卷曲,柔性区域较多,呈连续分布;非结构蛋白NS1无跨膜区和信号肽;预测非结构蛋白NS1含有3个N-糖基化位点、3个cAMP和cGMP依赖性蛋白激酶磷酸化位点、5个蛋白激酶C磷酸化位点、22个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、1个酪氨酸激酶磷酸化位点、8个N-肉豆蔻酰化位点、1个酰胺化位点及1个ATP/GTP结合位点基序A(P-环);该蛋白质抗原表位较多,存在10个主要的抗原表位。

摘要：为给猪伪狂犬病病毒的诊断及防治提供科学依据,参考GenBank中猪伪狂犬病病毒(PRV)gE基因序列,设计1对特异性引物,以PRV GZ-Z1株DNA为模板,进行gE基因的PCR扩增,扩增产物与pMD18-T载体连接、鉴定正确后,再亚克隆至pET32a(+)原核表达载体中,经鉴定后测序。结果表明:目的片段为PRV gE基因完整开放阅读框,大小1 734bp,编码577个氨基酸,在pET32a(+)载体中位置正确,表明,pET32a-gE原核表达质粒构建成功。该基因与国内外其他18株PRV的gE基因推导氨基酸序列同源性为94.8%～98.6%;与国外分离株属同一个进化分支,遗传关系相对较近;而与国内Fa、Min、GDSH等毒株亲缘关系较远。

摘要：为了解猪细小病毒（PPV）的分子流行病学和遗传变异等，对送检的疑似猪细小病毒感染病料进行了病毒分离鉴定，将分离毒株同步接种于ST细胞，并对分离病毒分别进行了血凝试验、中和试验、病毒理化特性和病毒核酸类型检测等鉴定；同时设计1对扩增PPVNS1基因主要抗原区的特异性引物，扩增、克隆和分析了分离毒株的NS1基因主要抗原区序列。结果表明：从送检的疑似猪细小病毒感染病料中成功分离出1株PPV贵州毒株，并将其命名为Gz株；扩增的NS1基因主要抗原区序列长度为1131bp；遗传进化分析表明，PPVGZ株与国内分离的GX株、N株、SR-1株、PPV2010株、s-1株和YL株的核苷酸序列同源性达到98．3％以上，推导的氨基酸序列的同源性为97．9％～100％，表明NS1基因序列比较保守，PPV的NS1基因主要抗原区基因克隆测序可以作为诊断猪细小病毒感染的依据。