摘要：目的:为获得低成本高酶活的工业化培养基,对甲硫氨酸γ-裂解酶(MGL)发酵生产培养基进行优化。方法:通过碳、氮源的筛选确定对酶活具有明显影响的因子,通过Plackett-Burman设计确定主要影响因子:甘油、安琪酵母粉、智龙酵母粉;采用最陡爬坡实验及Box-Behnken响应面设计确定了三个主要影响因子的最适条件,当甘油浓度为1.40%,安琪酵母粉为0.80%,智龙酵母粉为0.96%时,甲硫氨酸裂解酶酶活达到最高值为11.30 U/mL。结果:经过发酵验证,MGL酶活为(11.06±0.15)U/mL,较LB培养基1.65 U/mL提高了5.69倍,显示出了良好的优化效果。结论:经优化后最终培养基组成为:甘油1.40%、安琪酵母粉0.80%、智龙酵母粉0.96%、乳糖1.20%、安琪蛋白胨1.80%、NaCl 0.90%、K_2HPO_4 1.80%、MgSO_4 0.20%。

摘要：细菌素是细菌代谢过程中合成的具有抑菌性质的多肽类物质,它可以广泛地抑制革兰氏阳性菌,尤其是抑制单增李斯特菌等腐败菌和病原菌,大部分细菌素对热稳定,与食品一起在加热处理时使用依然能够稳定存在,并可在人体内进行生物降解和消化,对健康无害。利用分子克隆的方法在大规模筛选细菌素中具有快速准确的特点,根据已知的细菌素DNA序列设计保守的PCR引物,在从杏鲍菇子实体中分离得到56株乳酸菌中,有22株克隆出目的条带,其中只有一个样品稳定性好,经鉴定该样品的乳酸菌株为乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)。对克隆的细菌素Nisin-like基因测序结果表明该基因序列全长174bp。生物信息学分析显示该基因编码57个氨基酸,分子量大小5924.93 Da,等电点9.23,二级结构主要由α-螺旋和β-折叠股组成,与报道的有所不同,可能是新的细菌素。

摘要：目的:从杏鲍菇子实体与海带中分离的63株乳酸菌中鉴定出产细菌素Lcn972A的菌株,并对细菌素编码基因进行克隆与基因序列分析。方法:采用生物信息学手段对已报道的细菌素Lcn972A编码基因进行分析比较,设计引物,分别以各乳酸菌基因组DNA为模板,利用PCR克隆技术克隆出细菌素Lcn972A的基因,利用生物信息学工具对其核酸序列和预测的蛋白序列进行分析。结果:在63株乳酸菌的基因组样品中有15组被克隆出目的条带,其中杏鲍菇乳酸菌A15与海带乳酸菌CX2样品PCR产物条带清晰稳定性好,经鉴定两样品的乳酸菌株为乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)。对克隆的细菌素Lcn972A基因测序结果表明该基因序列全长276 bp。生物信息学分析显示该基因编码91个氨基酸,分子量大小22843.3 u,等电点5.33,氨基酸序列为亲水性,二级结构主要由α-螺旋、无规卷曲和延伸链组成。结论:从分离自杏鲍菇子实体乳酸乳球菌A15与海带乳酸乳球菌株CX2的细菌素编码基因及氨基酸序列与报道的有所不同,可能是新的细菌素,该细菌素的抗菌特点有待进一步的研究。