摘要：目的:利用大肠杆菌表达系统表达抗菌肽DCD-1L并鉴定其抑菌活性。方法:根据DCD-1L氨基酸序列以及大肠杆菌密码子偏爱性设计出DCD-1L的基因序列,通过重叠延伸PCR扩增出完整的DCD-1L编码序列,接着用酶切,连接,转化等方法获得重组表达载体pET-32a-DCD-1L,并将其进行PCR,酶切及测序鉴定。将鉴定正确的重组体转化*** transetta菌株,经终浓度0.5mmol/L IPTG诱导表达后,用SDS-PAGE分析目的蛋白表达状况,并用抑菌圈实验检测其抑菌活性。结果:SDS-PAGE检测DCD-1L在28KDa处有目的条带,抑菌圈实验结果显示DCD-1L对地衣芽胞杆菌,金黄色葡萄球菌,绿脓杆菌以及肺炎链球菌均有明显的抑菌活性。结论:成功构建重组表达载体pET-32a-DCD-1L并在*** transetta菌株中成功表达,获得了对多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有抑菌活性的抗菌肽DCD-1L。

摘要：目的:利用小鼠IgG抗体Fc片段高特异、高亲和寡核苷酸配基,构建实时定量免疫PCR检测方法,提高抗体检测的灵敏度。方法:用SELEX技术从随机寡核苷酸文库中筛选抗体Fc片段特异寡核苷酸配基,设计合成信标序列,通过不对称PCR法,制备IgG Fc片段的核酸信标配基分子;32P标记核酸信标配基,采用琼脂糖凝胶阻滞双显色法鉴定核酸信标配基与IgG Fc片段结合的亲和力和特异性;制备IgG Fc特异性寡核苷酸信标配基-抗体复合检测分子,构建小鼠IgG Fc片段特异核酸信标配基介导的实时定量免疫PCR检测方法。结果:制备了IgG Fc片段的核酸信标配基分子;凝胶阻滞放射自显影和考马斯亮蓝二次染色结果显示该核酸信标配基分子与IgG Fc片段具有高度亲和力和活性,而且只与非变性IgG结合,与变性IgG不结合;IgG Fc片段的特异核酸信标配基与IgG结合形成复合检测分子,有效完成了信号传递和实时定量PCR信号放大过程。结论:初步建立了一种全新的核酸信标配基介导的免疫PCR检测方法,可有效提高现有IgG类抗体免疫检测的灵敏度和特异性。

摘要：本研究采用3因子2水平正交试验设计对绿盲蝽人工饲料的配方进行了优化,得出了更优的绿盲蝽人工饲料配方E,其成分如下:蔗糖2.80g、啤酒酵母0.25g、50%蜂蜜水2.50g、混匀鸡蛋22.50g、小麦胚10.00g、利马豆粉30.00g、大豆粉2.50g、卵黄30.00g、大豆卵磷脂2.25g、复合维生素1.80g、10%乙酸0.50mL、硫酸链霉素0.005g、头孢羟氨苄0.005g、福尔马林0.10mL、丙酸0.10mL、无菌水164.00g。该配方单头饲养的绿盲蝽若虫存活率(81.25%)、若虫发育历期(11.68d)和成虫单雌产卵量(32.36粒)与四季豆饲养的无显著差异。与现有的绿盲蝽人工饲料相比该饲料进一步缩短了若虫的发育历期,但群体饲养的若虫存活率只有55.74%,显著低于四季豆饲养的若虫存活率(73.77%),仍需进一步优化。通过正交试验的极差分析,明确了影响绿盲蝽若虫存活率、发育历期和单雌产卵量因子的重要性为复合维生素>大豆卵磷脂≥蔗糖。本文还就配方的进一步优化进行了讨论。