摘要：背景:肿瘤干细胞理论的产生,对肿瘤的发生、发展及其发病机制有了更新的认识,为肿瘤研究提供了新的方向,通过无血清培养技术已从许多肿瘤中分离并鉴定出特定的肿瘤干细胞。目前,无血清培养已成为培养肿瘤干细胞的经典培养方法。目的:运用无血清培养的方法从肾癌细胞中获取肾癌干细胞,并进行鉴定。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-02/2009-02在江苏大学完成。材料:肾癌细胞株OS-RC-2由上海中科院细胞库提供。方法:取处于对数生长期的肾癌细胞OS-RC-2,悬浮于预先配好的DMEM/F12无血清培养基中(含表皮生长因子20μg/L,碱性成纤维细胞生长因子20μg/L),观察生长情况,培养7d后运用流式细胞仪测定CD133及CD34的表达。以不含细胞因子的高糖DMEM/F12培养液培养细胞作为阴性对照。另外收集无血清培养7d的肾癌细胞球,重悬于含体积分数为10%胎牛血清的高糖DMEM/F12培养基中,进行干细胞分化实验观察。主要观察指标:①倒置显微镜下观察肾癌干细胞生长情况。②流式细胞仪检测肾癌干细胞及肾癌细胞中CD133及CD34的表达。③收集无血清培养7d后的肾癌干细胞重新常规培养并观察其分化情况。结果:①肾癌细胞接种于含细胞因子的无血清培养基2d后可见有细胞球生成,7d后细胞球明显增多,体积增大。对照组肾癌细胞则贴壁生长,未见细胞球生成。②流式细胞仪检测显示,肾癌细胞球中CD133+CD34-表达率(8.33±1.26)%,对照组肾癌细胞表达率(1.24±0.36)%(t=-19.71,P<0.05)。③肾癌细胞球重新悬浮于含体积分数为10%胎牛血清的培养液2d后可见细胞球分散为单个细胞,恢复原来贴壁生长特点,CD133及CD34表达与阴性对照相同。结论:利用含细胞因子表皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子无血清培养的方法可以从肾癌细胞中获取肾癌干细胞。

摘要：背景：有研究表明端粒酶活性抑制剂不仅能抑制或杀死肾癌细胞,而且对决定肾癌发生发展的干细胞也有作用。目的：观察无血清悬浮培养的肾癌干细胞表面标志CD133及端粒酶活性的表达情况,并与含血清培养的肾癌细胞作比较。设计、时间及地点：细胞学体外观察,于2008-06/2009-02在江苏大学完成。材料：手术切除肾癌周围新鲜的正常肾组织标本由江苏大学附属医院提供,肾癌干细胞株OS-RC-2由上海中科院细胞库提供。方法：取处于对数生长期的肾癌干细胞OS-RC-2,胰酶消化后离心弃上清,悬浮于含EGF、bFGF的DMEM/F12无血清培养基中,调整细胞浓度为2×10^8L-1进行接种,在37℃、体积分数为5%的CO2培养箱中悬浮培养。以含血清培养的肾癌细胞及正常肾组织细胞作为对照。主要观察指标：倒置显微镜下观察细胞生长情况,流式细胞仪检测肾癌干细胞CD133及CD34的表达,采用TRAP实时定量检测肾癌干细胞端粒酶活性。结果：肾癌干细胞接种于无血清培养基后,细胞呈圆形悬浮于培养液中;2d后有细胞球生成,每个细胞球含3~8个细胞,折光性较强;7d后细胞球明显增多,体积增大,为规则的圆形或卵圆形。无血清悬浮培养的肾癌干细胞球CD133＋CD34-率明显高于含血清培养的肾癌细胞CD133＋CD34-率,正常肾组织细胞未测出有CD133及CD34的表达,3者间比较差异有显著性意义（F=328.25,P〈0.05）。肾癌干细胞球和肾癌细胞端粒酶活性均高于正常肾组织细胞（F=278.74,P〈0.05）,而前2者间端粒酶活性无明显差异。结论：与含血清培养的肾癌细胞相比,无血清悬浮培养的肾癌干细胞表面标志CD133呈明显高表达,二者端粒酶活性均高于正常肾组织。