摘要：为探讨PGIP蛋白与PG的互作及pgip基因在油菜抗黑胫菌病中的作用,根据Gen Bank中油菜pgip9、pgip15CDS序列设计引物,并去掉信号肽序列,以接种黑胫病病原菌Leptosphaeria biglobosa（菌株NM-1）7 d后油菜叶片总RNA反转录的c DNA为模板,PCR扩增出pgip9、pgip15除信号肽以外的编码区片段,并克隆到巴斯德毕赤酵母表达载体p PICZαA中构建重组质粒p PICZαA-pgip9、p PICZαA-pgip15。重组质粒经单、双酶切、菌落PCR筛选鉴定后热激化法转化酵母细胞PMAD16,再经Zeocin^TM的YPD平板和菌落PCR筛选鉴定,经甲醇诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot检测,均在36-37 k Da处出现单一的蛋白条带,蛋白分泌表达成功。通过对pgip基因的体外表达,为探讨PGIP蛋白与PG的互作及pgip基因在抗油菜黑胫菌病中的作用奠定基础。

摘要：CRISPR/Cas9是近年来快速发展起来的一种基因编辑技术,被广泛应用在多种物种中。Cas9是RNA导向的DNA内切酶,通过设计特异的导向RNA序列,将其与Cas9蛋白结合形成复合体。在基因组靶位点切开双链DNA,利用非同源末端连接(NHEJ)和同源重组(HR)的方式进行DNA修复时,会造成靶标核苷酸序列缺失、替换或引入外源DNA序列,形成定点核苷酸序列突变,达到精准修饰基因的目的。CRISPR/Cas9是相当简单和用途广泛的技术手段。该综述介绍了CRISPR/Cas9作用机理、技术路线及其在农作物品种改良研究中的应用,为该技术在农业领域的研究提供有益参考。