摘要：本研究旨在探讨融合蛋白TAT-RIG-I-GFP原核表达载体的构建并验证TAT在跨膜递送中的作用。首先设计了4对特异性引物,克隆了绿头鸭Anas platyrhynchos RIG-I基因,构建了pET-TAT-RIG-I-GFP和pET-RIG-I-GFP原核表达载体;转化至感受态DE3细胞,经IPTG诱导表达,利用His60镍亲和层析柱纯化,进行SDS-PAGE;然后,将纯化后的上述两种表达蛋白分别孵育DF-1细胞;最后利用荧光显微镜观察是否在DF-1细胞产生相应的荧光。结果证实,携带有TAT的pET-TAT-RIG-I-GFP融合蛋白在DF-1细胞中显示出明显的绿色荧光;而不具有TAT的pET-RIG-I-GFP蛋白却不能显示绿色荧光。这表明携带TAT的融合蛋白已成功进入DF-1细胞,并在跨膜递送过程中发挥了关键作用。上述为进一步研制家禽的抗病毒药物奠定了基础。

摘要：家长是孩子的第一任导师,合理利用家长资源能有效促进学前教育的发展.通过审视家长参与幼儿体育活动的现实问题,发现由于幼儿体育活动缺乏家长参与设计、家长认识偏差以及角色定位模糊等因素,导致家长参与幼儿体育活动效果不理想.提出家长参与幼儿体育应走制度化、常态化的发展之路,设计家园合作共育机制、搭建"幼儿园—社区—家庭"一体化家长参与幼儿体育活动的平台等推进策略.达到家长参与幼儿体育活动由"边缘化参与"向"积极参与"的转变.

摘要：为建立适合犬布鲁氏菌病临床检测的单重PCR方法,通过对比粗糙型(犬种)与光滑型(羊种、牛种和猪种)布鲁氏菌基因组DNA的序列差异,设计1对引物并优化反应条件,建立了可初步鉴别犬4种布鲁氏菌的PCR方法,然后对该方法的特异性和灵敏度进行评价,并对20份犬布鲁氏菌血清学阳性的血液样品进行临床检测。结果显示,利用建立的PCR反应体系对牛种、羊种和猪种布鲁氏菌均能扩增出717 bp的目的条带,对犬种布鲁氏菌能扩增出366 bp的目的条带;最低可检测到犬种、羊种、猪种和牛种布鲁氏菌基因组DNA浓度分别为5.07×10^(-2)、6.20×10^(-2)、7.80×10^(-3)和5.50×10^(-2) ng/μL;20份血液样品中共检测到3份犬种布鲁氏菌阳性样品,与使用GB/T 18646—2018引物的PCR检测结果一致。结果表明,本试验建立的单重PCR方法简捷、特异、敏感,适合基层兽医实验室对犬布鲁氏菌病的检测与鉴定。

摘要：传染性喉气管炎(ILT)是家禽重要的呼吸道疾病,主要危害成年鸡和产蛋鸡。但是,自2019年4月以来,在山东省多个地区发生多起商品肉鸡、地方品种肉鸡等感染该病并致病现象。临床主要表现为严重的呼吸困难、喘鸣、打喷嚏和伸颈呼吸,严重的咳出带血的分泌物,呼吸道粘膜出血和充血。经绒毛尿囊膜接种10日龄SPF鸡胚,5 d后可产生典型的绒毛尿囊膜病变。参考GenBank中传染性喉气管炎病毒(ILTV)的序列,设计出一对针对其ICP4基因的特异性引物,对可疑病料和分离出的病原分别进行PCR扩增,结果扩增出目的条带,经测序证实为ILTV。特异性和敏感性试验证实,新建立的PCR可快速、准确地鉴定出病原,具有一定的临床推广应用价值,为有效防控ILT的发生奠定了基础。