摘要：目的针对人源的CCL17和CCL22基因进行CRISPR/Cas9-gRNA设计,并验证设计的sgRNA的有效敲除效率。方法利用CRISPR网站提供的工具对CCL17和CCL22基因的靶向编辑位点进行筛选设计,然后构建CRISPR-Cas9-CCL17和CRISPR-Cas9-CCL22敲除质粒,并将构建好的质粒转入293 T细胞系,然后通过基因组PCR产物的T-A克隆测序方法分别验证设计的sgRNA敲除质粒的编辑效率。结果成功构建针对于人源CCL17和CCL22基因的sgRNA敲除质粒,并有着良好的编辑效率,均达70%以上。结论针对CCL17和CCL22基因设计的CRISPR敲除质粒对靶基因有着很好的编辑效果,为后续基于CCL17和CCL22的相关性研究奠定了基础。

摘要：目的针对人源TCRαC基因(TRAC)进行CRISPR/Cas9-gRNA的设计,并验证设计的gRNA的有效性及其脱靶率。方法利用CRISPR网站(http://***/)提供的靶向编辑位点筛选工具,针对TCRαC区各设计出了3个编辑位点,并据此构建CRISPR-Cas9-TCR敲除质粒,将构建好的质粒转染293T细胞系,通过流式细胞术结合PCR产物的T-A克隆测序等方法验证各个gRNA序列的编辑效率。再根据所预测的潜在脱靶位点,设计相应的上下游引物进行PCR扩增后测序,检测其是否出现脱靶。结果在3组针对TCRαC区的gRNA中,site2-gRNA的编辑效率最高,并且无脱靶现象。结论针对人源TCRαC基因设计的site2-gRNA对TCRαC区具有很好的编辑效果,且无脱靶现象,为消除杂合TCR分子的产生和改善TCR修饰的T细胞(TCR-T)过继性免疫治疗奠定了基础。