摘要：猪源嗜血支原体(Hemotropic mycoplasma,HM)寄生于猪红细胞表面及骨髓中,引起猪传染性贫血,给我国养猪产业造成危害。近年来病原流行病学调查发现我国流行三种HM,猪支原体(Mycoplasma suis,***猪附红细胞体),微小支原体(***)和新种Candidate Mycoplasma hemosuis(CMh)。且***在是我国浙江和海南猪群中的主要流行嗜血支原体,目前仅***有血清抗体检测方法报道。本研究根据*** ZJ9330株的甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因序列设计引物扩增404 bp的部分基因片段、原核表达纯化15 ku截短蛋白mp-tGAPDH,Western-blot表明纯化蛋白mp-tGAPDH与小鼠抗mp-tGAPDH血清有较好的反应性。以mp-tGAPDH为包被抗原,建立了检测***抗体的间接ELISA方法。特异性实验表明,建立的ELISA方法不与猪圆环病毒病、猪瘟、伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征和弓形虫阳性血清交叉反应。重复性实验表明,该ELISA方法批间和批内重复性低于18.4%,表明该法有较好的重复性。用建立的ELISA方法对浙江省上虞地区5个猪场248份临床送检血清进行了检测,***血清抗体阳性率为36.69%(91/248)。本研究建立的间接ELISA方法为猪微小支原体的检测和流行病学调查提供了一种快速简便的血清学诊断方法。

摘要：为获得具有良好抗原性的日本血吸虫重组蛋白,本研究设计了两对特异性引物,以日本血吸虫mRNA为模板,RT-PCR方法分别克隆基因片段Sj22.6ku和LHD-Sj23,以重叠延伸PCR方法将两个片段连接,构建原核重组表达质粒pET28-Sj22.6-LHD-Sj23;该重组质粒在大肠杆菌Rosetta DE3中表达后所获得的融合蛋白Sj22.6-LHD-Sj23分子量约为35 ku。Western blot鉴定结果表明该重组蛋白有良好的免疫原性,为进一步研制日本血吸虫病分子诊断试剂盒奠定了基础。

摘要：本实验室前期的流行病学调查中发现浙江省存在新种猪源嗜血支原体(CMh)的流行。为进一步确认该新种CMh,本研究设计兼并引物获得CMh gapA基因部分片段,通过Genome walking的方法获得了全基因cmh-gapA,大小为1 008 bp。基因序列比对分析表明cmh-gapA与犬***的gapA基因亲缘关系最近,同源性为74.6%。核苷酸序列的系统发育分析表明CMh与犬、猫的嗜血支原体位于同一分支,与***和***亲缘关系较远。本研究为CMh作为新种猪源嗜血支原体提供佐证,并为猪源嗜血支原体GADPH蛋白功能研究和血清学诊断方法的建立奠定基础。