摘要：目的:克隆幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)硫氧还蛋白-1(thioredoxin-1,Trx1)基因,构建含有该目的基因的原核细胞表达载体,表达纯化该蛋白,并检测该蛋白活性。方法:以Hp国际标准菌株26695的总RNA为模板,设计含有酶切位点的特异性引物,用逆转录PCR的方法扩增Hp Trx1的cDNA,连接至pEASY-T1载体构建成pEASY-T1-Hp Trx1。对pEASY-T1-Hp Trx1进行双酶切后将目的片段连接至pET-30a,形成pET-30a-Hp Trx1重组质粒,并在大肠杆菌BL21 plys S中进行表达。应用镍柱亲和层析纯化重组的Hp Trx1蛋白,并检测其二硫键还原酶的活性。结果:测序结果显示Hp Trx1 cDNA成功连入pET-30a质粒,且与GenBank(HP0824)完全一致。含质粒pET-30a-Hp Trx1的大肠杆菌BL21 plys S成功表达出Hp Trx1蛋白,活性检测显示重组Hp Trx1蛋白具有二硫键还原酶的活性。结论:成功构建原核表达载体pET-30a-Hp Trx1,并表达、纯化出有活性的Hp Trx1蛋白,为进一步研究Hp Trx1的生物学活性及其对肿瘤发生的作用机制奠定了基础。

摘要：目的 测定不同胃疾病分离的幽门螺杆菌（Hp）临床菌株中硫氧还蛋白（Trx）1、2基因序列,并确定其氨基酸序列,探讨其与相关疾病的关系.方法 通过胃镜获取慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌3种疾病共25例患者的胃黏膜组织,从中分离培养Hp菌株,提取基因组DNA.根据GenBank基因组中Hp基因序列设计Trx1、Trx2引物,应用聚合酶链反应（PCR）进行扩增,对扩增产物进行序列测定及生物信息学分析,并与国际标准菌株比对.结果 应用PCR的方法成功扩增出Trx1全基因序列及Trx2基因前295核苷酸.应用BioEdit软件进行核苷酸和氨基酸同源性分析,不同疾病分离的Hp Trx1均含有321个核苷酸,总突变位点率13.4%（43/321）;编码106个氨基酸,含有一个Cys-Gly-Pro-Cys氧化还原活性位点,25例不同胃疾病Hp TRX1的氨基酸同源性高达97.2%（103/106）.Trx2的前295个核苷酸,总突变位点率18.6%（55/295）;编码的氨基酸无Cys-Gly-Pro-Cys,含有一个CXXC区域,氨基酸同源性为84.7%（83/98）.结论 Hp临床分离菌株的Trx两个亚型核苷酸序列均有不同程度的位点突变,但氨基酸的序列同源性较高,均为无效突变.不同疾病分离的Hp Trx1均含有一个Cys-Gly-Pro-Cys氧化还原活性位点,TRX2仅含有一个CXXC区域.研究结果为进一步探讨Hp Trx的生物学功能及其致病机制提供了可靠依据.

摘要：临床研究是在复杂的临床环境中开展简单的科学研究，科学性与可行性之间矛盾突出，同时受到伦理限制，必须保证医疗质量和医疗安全，从研究方法角度获得理论、方法和技术支持尤为重要。上述问题和矛盾更多地集中在研究设计阶段和实施阶段，现有技术手段可以解决许多问题，但仍存在局限性，目前技术手段解决不好的问题需要引进新的研究方法。

摘要：随机对照试验的证据等级较高,但因其实施成本较高、外部真实性较低和伦理要求等原因而限制了其在临床开展和应用,而传统的观察性研究由于存在各种混杂因素导致内部真实性降低,从而降低了证据等级。断点回归设计(regression discontinuity design,RDD)是在自然条件下观察比较阈值附近的人群,其控制混杂的能力仅次于随机对照试验,可提供较高等级证据。它适用于干预(或暴露)与某连续变量的数值直接相关的情况,如HIV患者是否需要抗逆转录病毒治疗主要取决于其CD4细胞计数是否低于200/μL。因为连续变量的测量存在随机误差,在阈值附近是否给予干预是接近随机的,阈值附近干预和非干预组患者基线应该是均衡可比的。根据这一假设,比较阈值附近人群的结局,即可估计干预(或暴露)与结局的因果效应。RDD在医学中主要适用于分类结局的研究,其中两阶段最小二乘法、基于似然比的估计方法、贝叶斯方法是较常用的模型估计方法。然而,RDD的适用条件和对样本量的要求限制了其在医学中的广泛应用,随着数据可及性的提高和真实世界研究的发展,RDD将更多地应用于临床研究中。

摘要：整群随机对照研究是随机对照研究的一种特殊类型,指研究对象被整组随机分到试验组和对照组,每组所有个体接受相同的干预。整群随机对照研究一般多为多中心研究,或是一个中心按不同的病区或专家组划分为不同的组,对各组进行随机分组,同一组内进行相同的干预,它适用于一些不宜进行个体干预的情况,如母乳喂养的干预、儿童保健生活方式的干预等,这些干预一般是在门诊或病房进行宣传,即使进行个体化指导和宣传,也可能在同病房间产生沾染。另外一些临床实践指南和疾病预防的实施效果的研究也不适合进行个体干预,如儿童疫苗的推广,在进行完疫苗试验后,疫苗在个体水平的预防作用已经证实,但要从群体进行验证时,也非常适用整群随机对照研究。

摘要：在临床研究中，为了建立起更接近因果关系的统计学关联，往往会使用研究设计、多因素分析的方法来控制混杂因素，从而探索目标因素与某一临床结局之间的关系。例如探讨治疗措施（X）与患者疾病转归（Y）之间的关系时，就会通过研究设计或是统计分析方法控制其他混杂因素（C）。这些混杂因素有自己特定的特征，其主要特征就是C既是Y的“原因”同时又是X的“原因”。那就意味着证明一个因素是否是混杂因素本身就有一定的难度，需要我们在设计与分析的阶段充分考虑这一因素与X或Y在机制上有何关联，他人的研究结论如何等专业认识。

摘要：目的探讨幽门螺杆菌(***)相关慢性非萎缩性胃炎和慢性萎缩性胃炎的胃菌群特征及差异。方法采用前瞻性研究设计,将24例***感染的慢性胃炎患者分为慢性非萎缩性胃炎组(n=18)和慢性萎缩性胃炎组(n=6)。测定2组的胃黏膜菌群特征,并进行Alpha和Beta多样性分析及物种相关性分析。结果2组胃菌群均主要包括变形菌门、拟杆菌门、厚壁菌门、放线菌门和梭杆菌门。2组胃菌群的物种多样性和丰度差异具有统计学意义(ANOSIM分析,P=0.046)。慢性萎缩性胃炎组的梭杆菌属(P=0.023)、纤毛菌属(P=0.047)、普雷沃菌属(P=0.016)、月形单胞菌属(P=0.042)和密螺旋体属(P=0.006)显著富集,***呈下降趋势(P=0.218)。胃黏膜菌群的部分菌属与***呈负相关性,且慢性萎缩性胃炎的胃黏膜菌群中与***负相关的菌属种类明显减少。结论慢性萎缩性胃炎的胃黏膜中梭杆菌属、纤毛菌属、普雷沃菌属、月形单胞菌属和密螺旋体属显著富集,与慢性胃炎进展相关。

摘要：目的:探讨巨噬细胞加帽蛋白(macrophage-capping protein,CapG)对胃癌细胞系迁移和增殖能力的影响。方法:采用real-time PCR方法检测了4种胃癌细胞AGS、BCG823、PHM82、MNK45中CapG基因的表达情况,选择低表达并且易转染的AGS细胞作为研究对象,设计针对CapG的特异性引物并合成重组质粒。构建可以表达CapG的慢病毒包装系统,通过侵染人胃癌细胞系AGS,建立可稳定表达CapG的细胞株。通过CCK8实验分析过表达CapG基因对AGS细胞的生长和增殖能力的影响,细胞划痕以及Transwell小室实验分析过表达CapG基因对AGS细胞迁移能力的影响。结果:过表达CapG后,AGS细胞的生长速度略低于对照组,但二者间差异无统计学意义(t=2.424,P=0.073)。划痕试验显示CapG实验组划痕间距相对于对照组明显缩小,两组平均缩小距离分别为336.99μm和45.54μm,差异有统计学意义(t=14.97,P=0.004)。Transwell试验显示CapG实验组和对照组穿膜细胞数目分别为176个和70个,CapG实验组显著多于对照组,差异有统计学意义(t=40.00,P<0.001)。结论:过表达CapG基因对胃癌细胞系AGS细胞的生长和增殖无显著影响,过表达CapG基因能促进胃癌细胞系AGS细胞的迁移。

摘要：在很多临床研究中,我们都希望能够建立起＂因果关系＂,然而因果关系的建立很大程度上取决于研究设计本身,而非统计学上的关联.为避免将统计学关联过度推断为＂因果关系＂,临床研究者需要知晓因果关系推断的标准,完整的因果关系推断需要明确包括关联的时序性、强度、可重复性、因果论证强度、剂量-反应关系、生物学合理性、一致性、特异性这8个维度之后,才能做出明确的推断.

摘要：目的克隆人硫氧还蛋白-1(human thioredoxin-1,hTrx1)基因,并构建含有该目的基因的重组载体。方法以人胃癌细胞系BCG823、MNK45的总RNA为模板,设计含有酶切位点的特异性引物,用逆转录PCR的方法,扩增hTrx1编码蛋白的cDNA片段,连接至EZ-T载体,形成EZ-T-hTrx1。对EZ-T-hTrx1进行双酶切后将目的片段连接至pcDNA3.1myc-His,形成pcDNA3.1myc-His-hTrx1,并进行双酶切、测序鉴定。结果双酶切鉴定显示hTrx1cDNA成功连入pcDNA3.1myc-His质粒;测序结果显示目的片段连入质粒,且与GenBank(NM003329)完全一致。该实验成功构建出含hTrx1的重组载体pcDNA3.1myc-His-hTrx1。结论 hTrx1基因的克隆以及重组载体pcDNA3.1myc-His-hTrx1的成功构建,为进一步探讨hTrx1的生物学活性及其对肿瘤发生的作用机制奠定了基础。