摘要：背景:下尿路异常能够导致终末期肾病,但是在国内这部分患者没有得到足够的重视,并且因为移植物无功能及脓毒性并发症的高发生率,下尿路异常患者通常被认为不适合进行肾移植。目的:回顾性分析4例下尿路异常患者的肾移植特点及术后随访情况。设计、时间及地点:回顾性病例分析,于2002-07/2006-06在解放军总医院第二附属医院全军器官移植中心完成。对象:接受同种异体肾移植的4例下尿路异常终末期肾病患者。方法:4例患者在肾移植术前接受了详细评估,术中将移植肾输尿管再植入原来膀胱中,尿液引流方式均采取膀胱造瘘方法。主要观察指标:监测肾移植术后患者及移植物存活率、移植肾功能、尿路感染、排斥反应情况,并对患者的生活质量满意度进行评价。结果:①2例患者术后肾功能恢复良好,未发生排斥反应,有轻度但容易控制的尿路感染,患者能够处理尿液引流并对生活质量满意度良好。②1例患者术后17d发生急性排斥反应,治疗后逆转,带有功能移植肾存活至今。③1例患者术后因血管吻合部位反复出血导致移植肾丢失,恢复血液透析治疗。结论:下尿路异常患者可以进行肾移植,但具有特殊性,仔细的术前评估、适当的尿液引流方式以及严密的术后随访是此类患者肾移植成功的关键。

摘要：背景:胶原酶消化方法是胰岛细胞分离技术中关键的第1步,其成败关系到胰岛细胞移植的存活与功能。目的:针对不同质量浓度和同一质量浓度条件下不同时间点胶原酶分离纯化所获得胰岛细胞的效果进行对比,以确定理想的胶原酶分离胰岛细胞的标准化方案。设计、时间及地点:单一样本观察,细胞学体外观察,于2006-09/2007-05在解放军总医院第二附属医院全军器官移植实验室完成。材料:胰岛细胞供体为SD大鼠。将32只大鼠按随机数字表法分为4组,即胶原酶0.5g/L,1.0g/L,1.5g/L及2.0g/L组,每组8只。方法:每组前4只动物,采用0.5,1.0,1.5,2.0g/L4种质量浓度的胶原酶对胰腺进行分离,消化过程中每隔10min为1个时间点,双硫腙染色观察分离情况,分析结果并确定最适合获取胰岛量最多的时间点。随后每组另外4只动物按照确定时间点停止消化,应用间断密度梯度离心法纯化胰岛,双硫腙和丫啶橙-碘丙啶荧光染色分析移植物形态和存活率,确定分离所需胶原酶的最佳浓度。主要观察指标:调整胶原酶的质量浓度与消化时间,荧光显微镜下胰岛细胞计数,评估胶原酶最佳质量浓度及消化时间。结果:分析后确定各组胰岛细胞最佳获取时间,胶原酶0.5g/L组50min,胶原酶1.0g/L组40min,胶原酶1.5g/L及2.0g/L组均为30min。胶原酶0.5g/L组分离并纯化后胰岛细胞收获量显著低于其他3组(P0.05)。胶原酶2.0g/L组胰岛细胞平均存活率显著低于其他3组(P0.05)。结论:在胰腺灌注良好情况下,胶原酶消化条件控制在质量浓度1.5g/L,时间30min进行水浴振荡可获得很好的分离效果。

摘要：背景:前期研究表明,无细胞基质的组织工程膀胱支架材料有良好的生物相容性,无毒可吸收,符合组织工程生物支架材料的部分应用要求。目的:实验拟进一步观察无细胞基质组织工程膀胱生物支架材料的生物力学特性。设计、时间及地点:对比观察实验,于2006-07/2007-05在中国医学科学院北京协和医院中心实验室和北京大学高分子科学与工程系完成。材料:新鲜猪膀胱。方法:采用低渗-去污剂洗涤-核酸酶消化法对新鲜猪膀胱组织进行脱细胞处理,制备无细胞基质膀胱。对新鲜猪膀胱组织及制备的膀胱无细胞基质行苏木精-伊红染色和Masson染色。主要观察指标:测定膀胱组织在脱细胞前后组织的厚度、组织含水量、可溶性蛋白含量、最大位移、最大应力和断裂应力。结果:与新鲜膀胱组织相比,脱细胞后的膀胱组织中未见有细胞成分,保留了完整的细胞外基质。膀胱组织含水量在脱细胞后明显增加(P<0.001),组织厚度和可溶性蛋白含量明显降低,而经校正后的应力-应变参数及破坏强度则改变不明显。结论:无细胞基质膀胱与天然组织的生物力学特性一致或接近。

摘要：背景:2003年Banff移植病理会议正式将C4d在肾小管周围毛细血管中的特异性沉积列入体液性排斥反应的Banff诊断标准,体视学测定是一种重要的分析手段。目的:检测C4d在难治性排斥反应移植肾组织中的表达情况,对C4d阳性细胞进行体视学定量测定,分析其体视学指标与移植肾存活时间的关系。设计、时间及地点:回顾性病例分析,2006-12/2007-06在解放军总医院第二附属医院器官移植完成。对象:选择难治性排斥反应导致移植肾切除患者40例,所有移植肾标本石蜡切片均由解放军总医院第二附属医院病理科提供,移植肾存活时间大于5年者17例,小于5年者23例。方法:应用C4d多克隆抗体对移植肾组织石蜡切片行免疫组织化学染色,检测C4d在切除移植肾中的表达情况,运用图像分析系统在显微镜下测量C4d阳性细胞的体视学参数。主要观察指标:患者性别、年龄、冷缺血时间、热缺血时间、免疫抑制方案、移植后高血压以及是否为2次移植,C4d细胞群在移植肾标本中的分布情况,体视学分析结果。结果:40例切除移植肾中C4d阳性17例(42.5%),移植肾存活时间小于5年者的C4d细胞阳性率明显大于存活时间大于5年者(70.6%,29.4%)。移植肾组织中C4d阳性沉积与移植供受者的年龄、性别、免疫抑制方案、冷、热缺血时间以及是否为2次移植无关。存活时间大于5年的移植肾组织中C4d阳性细胞体视学参数核体密度、核表面积密度均小于存活时间小于5年者(F=12.7415,9.7337,P<0.01)。结论:C4d阳性沉积预示着移植肾功能预后较差,移植肾组织中C4d阳性细胞的核体密度、核表面积密度是影响其存活时间的重要指标。

摘要：背景:临床对pp65 抗原的检测主要采用免疫荧光技术,但是该方法步骤繁琐,需要对标本进行人工计数,在检测过程中受人为的影响因素较多。目的:探讨使用简便的流式细胞技术检测人巨细胞病毒 pp65 抗原血症的可行性及其特点。设计、时间及地点:对比观察实验,于2007-09/2008-03 在解放军总医院附属二院器官移植中心完成。材料:肾脏移植受者外周血标本145份。方法:分离人外周血白细胞,分别采用免疫荧光技术与流式细胞技术对人巨细胞病毒 pp65 抗原检测。主要观察指标:流式细胞仪在激发波长为 488 nm 处的吸收峰判断阳性检出。结果:对肾脏移植受者进行免疫荧光技术检测,在 15 例受者的 25 份标本中检出阳性,检出的特异性为 76.0%;对肾脏移植受者进行流式细胞技术检测,在 5 例受者的 11 份标本中检出阳性,检出的特异性为 54.5%。使用 Fisher 确切概率法对两种不同检测方法检出的效果进行检验,结果两种检测方法的检出效果差异无显著性意义(P > 0.05)。结论:免疫荧光技术和流式细胞技术两种 pp65 抗原检测方法的检出效果无差异,因此可以通过流式细胞技术对 pp65 抗原进行检测,并且结果更加客观。

摘要：背景:天然生物支架材料可能含有一定量的生长因子,在组织工程膀胱构建中存有其潜在的生物学行为。目的:观察去细胞处理后猪膀胱无细胞基质支架材料中转化生长因子β1含量的变化。设计、时间及地点:细胞组织工程学实验,于2006-07/2007-03在中国医学科学院北京协和医院中心实验室完成。材料:取材0.5h内的猪新鲜膀胱标本12个,采集自北京市资源肉联厂,随机分为对照组、去细胞组,6个/组。方法:去细胞组采用低渗-去污剂洗涤-核酸酶消化法对新鲜猪膀胱进行脱细胞处理,制备膀胱无细胞基质,对照组不做任何处理。主要观察指标:苏木精-伊红染色观察膀胱去细胞效果,采用二辛可宁酸法测定可溶性蛋白含量,酶联免疫吸附试验测定转化生长因子β1含量。结果:对照组新鲜膀胱组织细胞结构完整,去细胞组膀胱组织细胞成分已基本去除,未见有核成分残留。去细胞组可溶性蛋白含量为(0.143±0.053)%,转化生长因子β1含量为(113.31±43.02)ng/kg,均明显低于对照组(t=15.56,P<0.001;t=24.63,P<0.001)。结论:采用低渗-去污剂洗涤-核酸酶消化法可有效去除猪膀胱细胞成分,但仍有一定量的转化生长因子β1残留,可能为种子细胞生长提供有利因素。

摘要：背景:猪异种移植过程中可能发生猪内源性反转录病毒跨种间传播的潜在危险,由此所带来的异种移植生物安全性问题逐渐受到关注。目的:观察去细胞过程对猪膀胱内源性反转录病毒的影响,以评价猪源性膀胱无细胞基质生物工程材料在异种移植中的生物安全性。设计、时间及地点:基因工程与组织工程动物体内实验,于2006-07/2007-03在中国医学科学院北京协和医院中心实验室完成。材料:正常健康雄性杂种犬8只,随机分为对照组2只,修补组6只,用于膀胱修补替代实验。取材0.5h内的猪新鲜膀胱标本采集自屠宰厂。方法:采用低渗-去污剂洗涤-核酸酶消化法对新鲜猪膀胱进行脱细胞处理,制备膀胱无细胞基质移植物。对照组犬切除50%膀胱后原位直接缝合,不使用任何材料修补;修补组犬切除50%膀胱后,分别用面积约为原膀胱30%,40%,50%的膀胱无细胞基质移植物进行替代修补。分别于移植前及移植后1个月抽取犬静脉血提取RNA和DNA,以猪Beta-actin序列片段扩增产物作为内参照,针对内源性反转录病毒gag区序列,选用特异性引物,采用PCR和RT-PCR法检测上述提取的DNA和RNA是否存在内源性反转录病毒序列片段,并对扩增产物进行测序用于同源性分析。主要观察指标:苏木精-伊红染色观察猪膀胱去细胞效果及DNA含量。PCR及RT-PCR扩增及测序结果。结果:经去细胞处理后,猪膀胱内的细胞成分完全去除,三维纤维支架保持完整,DNA含量低于1%。新鲜猪膀胱PCR和RT-PCR均检测到362bp扩增条带,与Medline公布的内源性反转录病毒有94%的同源性;所制备的生物工程材料膀胱无细胞基质移植物、及其移植前后的犬外周血样本均未检测到内源性反转录病毒序列的表达。结论:低渗-去污剂洗涤-核酸酶消化法制备的膀胱无细胞基质移植物可以去除猪膀胱内源性反转录病毒,能够有效预防内源性反转录病毒在物种间的交叉感染,具有良好的生物安全性,可作为生物工程材料进行异种移植相关实验。

摘要：背景:通过筛选小鼠反转录病毒cDNA文库和质谱分析的方法鉴定出一种跨膜的胶原XVII是白细胞相关免疫球蛋白样受体1和白细胞相关免疫球蛋白样受体2的配体之一,然而,二者的其他配体尚未得到鉴定。目的:采用生物信息学法鉴定白细胞相关免疫球蛋白样受体1和白细胞相关免疫球蛋白样受体2(CD305/306)的候选配体分子。设计、时间及地点:生物信息学预测及生物学方法验证,于2006-03/2007-09在第四军医大学免疫教研室完成。材料:人WISH和Hela细胞系由第四军医大学免疫教研室冻存。方法:应用生物信息学方法搜索白细胞相关免疫球蛋白样受体1和白细胞相关免疫球蛋白样受体2序列同源分子,并通过文献检索初步推测白细胞相关免疫球蛋白样受体1和白细胞相关免疫球蛋白样受体2的配体候选分子。最后应用候选分子基因转染K562细胞,并应用白细胞相关免疫球蛋白样受体1-Fc/白细胞相关免疫球蛋白样受体2-Fc融合蛋白进行活细胞荧光染色,流式细胞术分析鉴定候选分子是否与融合蛋白结合。同时,合成两对候选分子的引物,提取高表达白细胞相关免疫球蛋白样受体1和白细胞相关免疫球蛋白样受体2配体分子的细胞系WISH的cDNA,进行巢式PCR,检测WISH中候选分子的表达情况。主要观察指标:应用人类基因组数据库对白细胞相关免疫球蛋白样受体1和白细胞相关免疫球蛋白样受体2分子氨基酸序列同源性比对结果,流式细胞术分析白细胞相关免疫球蛋白样受体分子是否与可能配体基因转染细胞结合,巢式PCR分析白细胞相关免疫球蛋白样受体配体高表达细胞是否表达可能配体基因。结果:应用生物信息学方法和文献检索初步推测白细胞相关免疫球蛋白样受体1和白细胞相关免疫球蛋白样受体2的配体候选分子为人类白细胞抗原G分子。经流式细胞术鉴定,白细胞相关免疫球蛋白样受体1-Fc/白细胞相关免疫球蛋白样受体2-Fc融合蛋白对人类白细胞抗原G基因转染的K562细胞的荧光染色结果为阴性;经巢式PCR鉴定,高表达白细胞相关免疫球蛋白样受体1和白细胞相关免疫球蛋白样受体2配体分子的WISH细胞系中未发现人类白细胞抗原G基因。结论:人类白细胞抗原G不是白细胞相关免疫球蛋白样受体1和白细胞相关免疫球蛋白样受体2的配体。

摘要：背景:全血细胞减少的病因复杂,如能在骨髓穿刺检查前科学推断出患者病因的归类,显然有利于疾病的早期诊断并减少误诊的发生。目的:构建全血细胞减少分类诊断的判别函数。设计、时间及地点:判别分析,于2004-10/2008-02在解放军总医院第二附属医院血液科完成。对象:纳入107例初诊的全血细胞减少患者。方法:对全血细胞减少患者的临床资料进行回顾性分析,考察变量为伴随症状、体征和各项检验结果共15项指标,应用SAS软件构建定性资料的Bayes判别函数。主要观察指标:考察变量为血常规3项、血沉、乳酸脱氢酶、C反应蛋白、淋巴细胞比例、网织红细胞、平均红细胞体积、发热、出血、骨关节痛、肿大、水肿及皮疹等15项指标。结果:最后确诊造血系统疾病92例(86%),其中恶性血液病52例(48.3%),非恶性血液病40例(37.7%),非造血系统疾病共15例(14%)。按构成比从高到低顺序排列前6位疾病为骨髓增生异常综合征(28.0%)、再生障碍性贫血(15.7%)、急性白血病(11.1%)、自身免疫病(11.1%)、巨幼细胞性贫血(8.3%)、淋巴瘤及多发性骨髓瘤(6.4%)。利用判别得分将已确诊的20例患者资料回代入判别函数,结果总体判别正确率达85%。结论:Bayes判别分析在全血细胞减少类疾病的鉴别诊断中能用于初步筛查,协助早期确诊。

摘要：背景:在器官移植急性排斥反应过程中,靶细胞的凋亡被认为是移植物功能丧失的主要作用途径之一。细胞凋亡受一系列分子调控,其中Bcl-2家族起着决定性作用;Fas系统介导的细胞凋亡亦在移植免疫中起十分重要的作用。目的:分析移植肾发生急性排斥反应时Bcl-2/Bax,Fas/FasL蛋白表达规律与急性排斥反应预后的关联。设计、时间及地点:观察对比实验,于2002/2005在解放军总医院第二附属医院器官移植中心完成。对象:收集肾移植术后发生急性排斥反应的移植肾穿刺活检蜡块标本30例;另选同期20例无明显排斥反应表现肾移植患者的移植肾穿刺活检蜡块标本作为对照组。方法:应用免疫组织化学方法检测移植肾急性排斥反应穿刺活检标本中Bcl-2/Bax,Fas/FasL蛋白的表达水平,并与对照组进行对比。主要观察指标:急性排斥组和对照组移植肾穿刺活检标本中Bcl-2/Bax,Fas/FasL蛋白的表达水平。结果:①Bcl-2/Bax,Fas/FasL蛋白主要在肾小管上皮细胞中表达。②两组肾小管上皮细胞中Bcl-2表达水平差异无显著性意义(P>0.05),急性排斥反应组肾小管上皮细胞中Bax,Fas及FasL蛋白表达水平均高于对照组(P<0.05)。结论:在肾移植急性排斥反应中Bcl-2家族可能参与调控细胞凋亡,引起移植肾免疫损伤;Fas及FasL可能直接参与移植肾急性排斥反应,造成肾小管上皮细胞凋亡,引起移植肾免疫损伤。