摘要：背景:虽然人们对铅毒性引起机体的损害有了较深入认识,但铅负荷对T细胞淋巴细胞亚群的影响还不十分明确。目的:评估血铅对儿童T细胞亚群的影响,以及血铅临界值与T细胞亚群的关系。设计:对比观察。单位:山西省儿童医院妇幼保健院分子微生物研究所。对象:选择2003-05/2003-10太原市南郊和北郊区儿童60人,男32人,女28人;年龄3～6岁,平均(4.5±1.5)岁。监护人均对检测项目知情同意。根据血铅值将儿童分为3组:≥0.48μmol/L组(n=13),≥0.24μmol/L,<0.48μmol/L组(n=20),<0.24μmol/L组(n=27)。方法:①采用石墨炉原子吸收光谱法测定血铅水平。T细胞亚群检测用免疫荧光法。②计量资料差异性比较采用t检验。血铅与T细胞亚群关系采用直线相关分析。主要观察指标:①不同血铅水平儿童T细胞亚群表达比较。②血铅水平与T细胞亚群的关系。结果:儿童60人均进入结果分析。①≥0.48μmol/L组儿童CD3表达及CD4/CD8比值明显低于<0.24μmol/L组(t=3.27,3.07,P<0.01)。②血铅值≥0.48μmol/L时血铅水平与CD3表达及CD4与CD8比值呈显著负相关(r=-0.689,-0.674,P<0.01),与CD8表达呈显著正相关(r=0.748,P<0.01)。结论:血铅值水平≥0.48μmol/L,可使外周血CD3表达及CD4与CD8比值下降,对小儿免疫功能产生不良影响。

摘要：目的建立实时荧光定量聚合酶链反应(PCR),检测肺部感染患者痰液中军团菌属特异性16SrRNA基因。方法利用军团菌属特异性16SrRNA基因保守序列设计引物和探针,优化反应条件和反应体系,对嗜肺军团菌、非嗜肺军团菌及其他病原菌标准菌株进行检测,验证该方法的特异性、敏感性、重复性;并对557例肺部感染患者痰液标本进行检测,同时采用PCR酶切法作比较,阳性者对基因扩增产物测序做验证试验。结果该方法检测军团菌属所有标准菌株均出现阳性信号,其他非军团菌属检测结果均为阴性,灵敏度为102 CFU/mL;577例肺部感染患者的痰液标本,实时荧光定量PCR军团菌检出阳性率为23.1%,PCR酶切法检出阳性率为19.9%,经16SrRNA基因测序验证军团菌阳性率为17.2%,3种方法检出阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论实时荧光定量PCR检测患者痰液标本中军团菌,具有快速、简便的特点,可作为临床军团菌感染患者的一种辅助诊断试验。

摘要：目的构建HJURP基因的RNA干扰慢病毒表达载体并在人胚胎绒毛细胞上鉴定其沉默效率,进而提供HJURP基因缺陷表达的原代胚胎绒毛细胞模型。方法针对目的基因HJURP的序列,按照RNA干扰序列的设计原则,设计合成3个HJURP基因特异性的小分子干扰RNAi靶点,将其合成短发夹RNA(sh RNA)并退火形成双链RNA,克隆至慢病毒载体中形成sh RNA表达载体,通过PCR和测序鉴定获取正确重组载体。将筛选出的重组载体与慢病毒包装质粒共转染293T细胞并测定病毒滴度。随后将其干扰人胚胎绒毛细胞,采用Western blotting和real-Time PCR检测靶基因的沉默效率。结果对重组载体p HBLVU6-Zs Green-Puro进行测序鉴定,证实插入的sh RNA序列无碱基变异。重组慢病毒载体经293T细胞包装后,病毒滴度为108PFU/ml。RNA干扰人胚胎绒毛细胞HJURP基因后,可见感染后内源HJURP的蛋白表达水平显著下降,HJURP m RNA水平明显下降,其中sh RNA1干扰效率大于70%。结论成功构建了HJURP基因的sh RNA慢病毒表达载体,该重组载体可以在细胞水平有效沉默靶基因,为后续研究HJURP基因表达抑制对人胚胎绒毛细胞的增殖凋亡和染色体分离的影响,探索HJURP基因在自然流产发生中的作用机制提供细胞模型。