摘要：目的 构建干扰Ppif基因的重组U6慢病毒质粒,观察内源性小干扰RNA（siRNA）的效果.方法 根据siRNA设计原则,设计合成短发卡RNA（shRNA）,用于体内转录合成干扰Ppif编码序列的发夹RNA.连接、筛选、酶切,鉴定Pgcl-GFP/U6 Ppif shRNA;以含无关序列发夹结构的质粒载体为对照,感染大鼠肾细胞株,采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）和Western blot检测mRNA和蛋白表达水平与对照组的差异.结果 测序证实重组质粒构建成功,体外试验表明,Ppif基因的mRNA和蛋白表达均一致降低[（0.582 ±0.014）％],与阴性对照组[（0.946±0.018）％]和空白对照组[（0.893±0.021）％]比较,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 慢病毒介导的Ppif-shRNA成功在体外敲减了大鼠肾细胞的目的蛋白表达,影响了肾缺血再灌注的发生与发展.

摘要：目的:体外构建和表达人前列腺特异性膜抗原胞外区(tPSMA)基因重组腺病毒。方法:首先设计一对含BglⅡ和HindⅢ酶切位点的tPSMA引物,以质粒pCR3.1-Uni-hPSMA为模板,通过PCR扩增tPSMA并克隆到腺病毒穿梭质粒中,获得pAdTrack-CMV-tPSMA质粒,将其与含有pAdeasy-1的BJ5183菌电转化,筛选阳性克隆,重组子经线性化后转染HEK293细胞,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达、RT-PCR、Western blot法检测目的基因tPSMA的表达。结果:成功构建了含tPSMA的重组腺病毒载体Ad-tPSMA,病毒滴度为2.0×1011pfu/L。结论:该重组腺病毒的构建为下一步研究用其制备树突状细胞疫苗基因治疗提供基础。

摘要：目的研究人前列腺癌PC-3细胞90K/Mac-2BP基因干扰后其mRNA表达水平及细胞凋亡的效果。方法设计、构建多个针对90K/Mac-2BP的干扰性小RNA(small interfering RNA,siRNA),转染前列腺癌PC-3细胞,筛选出对90K/Mac-2BP基因干扰效率最高的90K/Mac-2BP siRNA,采用RT-PCR、Western blot技术检测90K/Mac-2BP mRNA及蛋白表达,酶标仪测定PC-3细胞的增殖,流式细胞仪检测PC-3细胞凋亡率。结果实验组和对照组前列腺癌PC-3细胞90K/Mac-2BP mRNA的表达强度分别为(19.23±1.33)%、(46.34±1.26)%,细胞凋亡率分别为(16.64±1.18)%、(2.52±0.19)%,两组差异有统计学意义(P<0.05)。表明构建的表达载体有效抑制了90K/Mac-2BP mRNA表达并诱导细胞凋亡。结论 RNA干扰可有效抑制PC-3细胞90K/Mac-2BP mRNA和蛋白表达,并诱导细胞凋亡。