摘要：外泌体是直径在30~100nm的胞外囊泡,通过细胞被释放到细胞外液中[1]。它们存在于生物体液中,诸如血液和脑脊液。外泌体携带有DNA、RNA、蛋白质和脂质等。由于外泌体的微泡结构为其内在的小分子提供了一个安全稳定的环境,同时这些信号小分子利用循环系统在胞间信号交换发挥重要作用,这让外泌体表现出一个成熟、稳定的信号传输系统[2]。研究发现,外泌体中的mRNA和microRNA(miRNA)可从一个细胞转移到另一个细胞中,并在新的细胞中发挥功能[3]。因此,外泌体是理想的细胞间信息传递媒介[4]。外泌体通过如下3种方式进行细胞间信息传递:膜融合后内容物释放、膜表面信号分子以及信号分子胞外释放。细胞可通过分泌外泌体对各种刺激作出应答,在肿瘤组织中,肿瘤局部缺氧可以促进乳腺癌细胞释放更多的外泌体进入肿瘤微环境。

摘要：目的:研究下调着丝粒蛋白W(centromere protein W,CENP-W)的表达水平对人脑胶质瘤U87细胞的影响。方法:采用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制人脑胶质瘤U87细胞CENP-W的表达,采用RT-qPCR和Western blot法评价siRNA的干扰效果,采用MTT法、BrdU实验和平板集落形成实验测定细胞的增殖,Transwell小室检测细胞侵袭力的变化,划痕实验检测细胞迁移能力的变化,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡的改变。结果:MTT实验、平板集落形成实验和BrdU实验显示转染siRNA的实验组U87细胞的增殖能力、集落形成能力较空白对照组及阴性对照组明显降低;Transwell实验和划痕实验显示实验组细胞的迁移、侵袭能力较空白对照组及阴性对照组明显减弱;流式细胞术分析表明实验组细胞的细胞周期被阻滞在G_0/G_1期;实验组细胞凋亡比例较对照组增多(P<0.05)。结论:下调CENP-W的表达可抑制人脑胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力并促进细胞的凋亡,提示CENP-W有望成为人脑胶质瘤基因治疗的候选靶点。

摘要：目的构建RWD结构小泛素化增强子(RWDD3)shRNA慢病毒表达载体,为探讨RNA干扰技术抑制人脑胶质瘤细胞RWDD3基因的相关研究奠定基础。方法设计RWDD3的3条siRNA的靶点序列,合成含干扰序列的双链DNA发卡结构shRNA,分别与双酶切后的载体连接,构建3种重组质粒pGC-LV-shRNA1、pGC-LV-shRNA2和pGC-LV-shRNA3,并转化于DH5α感受态细胞,提取阳性克隆质粒测序,转染293T细胞,生产慢病毒颗粒,并检测病毒滴度。将3种重组慢病毒及阴性对照病毒分别感染人脑胶质瘤细胞U251,实时定量PCR和Western blot分别检测RWDD3mRNA和蛋白的沉默效果。结果测序结果证实3种慢病毒载体均包装成功,滴度分别为5×10^(11) TU/L、4×10^(11) TU/L、5×10^(11) TU/L。感染U251后,RWDD3mRNA及蛋白的表达量均较阴性对照组和未感染组明显降低(P0.05)。结论成功构建3种RWDD3shRNA慢病毒表达,可有效下调U251细胞RWDD3mRNA和蛋白的表达,其为进一步研究以RWDD3为靶点的脑胶质瘤基因治疗提供稳定转染细胞的载体奠定基础。

摘要：目的探讨过表达SNORD47对U87-EGFRvIII胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响。方法将对数生长期U87垣GFRvIII胶质瘤细胞分为SNORD47组、阴性对照组、空白对照组3组，前2组分别转染携带SNORD47核苷酸序列、阴性对照核苷酸序列的重组慢病毒，空白对照组不作任何处理。48h后qRT—PCR检测3组细胞SNORD47的表达水平：Westernblotting检测3组细胞基质金属蛋白酶2（MMP2）、MMP9蛋白的表达；CCK-8实验检测接种后4、24、48、72、96h3组细胞的存活率：平板克隆实验检测3组细胞的克隆能力；划痕实验、Transwell侵袭实验分别检测3组细胞的迁移能力和侵袭能力。结果qRT-PCR和Westernblotting检测显示：与阴性对照组及空白对照组比较，SNORD47组细胞SNORD47表达水平升高，MMP2、MMP9蛋白表达水平降低，差异均有统计学意义（P〈0．05）；CCK-8和平板克隆实验显示：与阴性对照组及空白对照组比较，SNORD47组细胞接种后48、72、96h吸光度值降低，SNORD47组细胞克隆数降低，差异均有统计学意义（P〈0．05）：划痕实验、Transwell侵袭实验显示：与阴性对照组及空白对照组比较，SNORD47组划痕损伤面积增大，穿膜细胞数明显减少，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论SNORD47能有效抑制u87-EGFRvIII胶质瘤细胞的增殖和侵袭能力。

摘要：目的探讨上矢状窦、镰旁巨大脑膜瘤的术前设计及术中处理上吻合静脉、上矢状窦的方法，提高矢状窦、镰旁巨大脑膜瘤的手术疗效。方法回顾性分析南昌大学第二附属医院神经外科自2001年1月至2010年12月收治的35例矢状窦、镰旁巨大脑膜瘤患者的临床资料，患者均经充分的术前准备并设计较详细的手术方案，行显微手术全切或次全切除术，术中对受累的上吻合静脉、上矢状窦、硬脑膜及颅骨做相应的处理。结果35例患者中肿瘤切除达到SimpsonI级21例。SimpsonⅡ级12例，SimpsonIII级2例。术后遗留颅骨缺损5例；单侧肢体瘫痪（肌力I～Ⅳ级）5例，双下肢瘫痪（肌力I～Ⅱ级）1例，经高压氧、针灸理疗等综合治疗1～6个月后均恢复正常。随访6～24个月，SimpsonⅢ级切除者2例复发。结论通过术前充分的MRI、MRA、DSA、CTA等影像学评估及设计较详细的手术方案，术中采用显微外科技术、有效地控制出血、妥善处理好上矢状窦及受累的上吻合静脉、避免正常脑组织医源性损伤、尽可能全切或次全切除肿瘤，是提高矢状窦、镰旁巨大脑膜瘤手术疗效的重要因素。

摘要：目的探讨外泌体对人神经母细胞瘤细胞株（SH—SY5Y）缺氧再灌注损伤的影响。方法构建人脐静脉血管内皮细胞（mJVEC）缺氧再灌注损伤（HUVECI／R1模型．从中提取外泌体并予以鉴定。构建***5Y细胞缺氧再灌注损伤（***5YI／R）模型并分为2组．其中外泌体组于再灌注同时予以外泌体刺激，对照组于再灌注同时予以无外泌体血清培养基培养。采用CCK8法检测2组细胞培养24h、48h、72h时细胞活力，采用Hochest33258染色检测细胞凋亡情况，采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况及细胞周期，采用划痕实验、Transwell侵袭实验分别检测细胞迁移能力和侵袭能力，采用***、Westernblotting检测细胞中Caspase-3、Bax、Bcl-2mRNA和蛋白表达。结果与对照组比较，外泌体组细胞培养48h、72h时细胞活力明显提高（48h：0．70±0．05vs0．94±0．08；72h：0．83±0．05vs1．02±0．06），G0／G1期细胞比例明显降低（71．26％±5．24％vs566．87％±4．23％）．S期细胞比例明显增高（14．39％±4．11％vs20．54％±3．46％），相对划痕损伤面积明显减少（0．61±0．07vs50．52±0．10），穿膜细胞数量明显增多（44．00±6．56vs70．67±6．11），细胞中Bax、Caspase-3mRNA表达水平明显降低、Bcl-2mRNA表达水平明显增高，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论HUVECI／R模型来源外泌体可在SH-SY5Y细胞缺氧再灌注损伤后发挥神经保护作用。