摘要：目的利用CRISPR/Cas 9系统在人肺癌细胞系A549和H460中获得敲除腺苷单磷酸活化蛋白激酶α1(adenosine monphosphate-activated protein kinase,AMPKα1)的稳定表达细胞系。方法根据CRISPR/Cas 9靶点设计原则,设计三条引导RNA(sgRNA),分别构建AMPKα1-CRISPR/Cas9 KO及其HDR质粒。将质粒转染至A549和H460细胞后,筛选稳定的单克隆细胞株。用Western blot鉴定筛选获得的肺癌细胞株是否表达AMPKα1。实验被分为原始对照组和敲除组,采用MTT法检测AMPKα1的肺癌细胞增殖情况。结果经过CRISPR/Cas 9系统处理后,筛选获得的A549和H460敲除AMPKα1稳定细胞株与原始细胞株A549和H460相比,Western blot检测不到AMPKα1蛋白质的表达,差异具有统计学意义(t=137.7,79.17,均P<0.0001)。MTT结果显示,筛选获得的A549和H460敲除AMPKα1的稳定细胞株与原始细胞株A549和H460相比,敲除细胞株的增殖速度明显减弱,差异具有统计学意义(t=3.956~28.16,均P<0.05)。结论CRISPR/Cas 9系统成功建立敲除AMPKα1表达的稳定肺癌细胞株,为进一步研究AMPKα1在肺癌发生发展中的作用提供细胞模型。

摘要：目的旨在建立基于妇女保健适宜技术的社区卫生、计划生育及生育文化三位一体的社区妇女保健服务模式(简称"三位一体服务模式")。方法随机抽取社康中心女性就诊患者450人,采用自行设计的调查问卷进行问卷调查,通过比较三位一体服务模式开展前后女性生殖健康知识、行为及态度的变化,评价该模式的实施效果。结果 "三位一体服务模式"实施后,女性患者对性生理知识、避孕知识和性病知识得分显著高于项目实施前得分,差异有统计学意义(P<0.05),反对"婚前性行为"、"多个性伴侣",支持"婚前检查"、"避孕"的比例显著高于项目实施前,差异有统计学意义(P<0.05)。结论"三位一体服务模式"取得了一定的效果,流动女性人口生殖健康状况有所改善,下一步将扩大该模式的实施范围,扩大研究样本量。

摘要：文章首先阐述了运用心理游戏构建职业院校心理健康教育活力课堂的价值,然后提出了运用心理游戏构建职业院校心理健康教育活力课堂的策略,包括合理地选择或设计心理游戏、有效地组织心理游戏两个方面,最后分析了运用心理游戏构建职业院校心理健康教育活力课堂存在的问题及建议。

摘要：通过对林西县自然环境、社会经济以及森林资源现状的研究,在此基础上对该县森林生态系统进行了系统的分析,为今后的森林经营工作提供合理的科学依据。

摘要：环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测技术具有快速、敏感、仪器简单的优势。为了达到多重鉴别检测的目的,将分子信标引入LAMP反应体系,建立一套鉴别不同毒力新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的可视化双重荧光RT-LAMP方法。分别设计2套扩增不同毒力ClassⅡNDV F基因的LAMP引物,针对区分NDV毒力的分子标志F蛋白裂解位点的基序差异设计2条分子信标。中、强毒NDV分子信标5′端标记FAM荧光基团,3′端标记Dabcyl淬灭基团;弱毒NDV 5′端标记CY5荧光基团,3′端标记BHQ3淬灭基团。用经过条件优化的RT-LAMP体系对不同毒力NDV及其他病原进行鉴别检测,结果显示,LAMP引物能特异地扩增ClassⅡNDV,在荧光成像仪下,中、强毒NDV显示绿色荧光,弱毒显示红色荧光,混合感染显示黄色荧光,而其他家禽常见病原无荧光显示;以体外转录的NDV ssRNA片段为模板,建立的RT-LAMP反应体系最低检测限度为100 copies/μL;随机检测疑似NDV病料20份,鉴定结果与经分离、测序鉴定的结果一致。本研究建立的分子信标与LAMP结合的检测方法,可为NDV多重检测提供新的思路。

摘要：介绍了基于法拉第磁光效应的光学电流互感器的基本原理及线性双折射对系统性能的影响,结合电磁式电流互感器的良好稳态性能和光学电流互感器的无饱和暂态性能,设计了一种基于小波分析和神经网络的光学电流互感器误差补偿系统。小波分析用于检测电力系统的故障时刻从而区分暂态和稳态,神经网络用于补偿光学电流互感器线性双折射效应。通过仿真实验证明:系统能够对光学电流互感器的线性双折射等误差因素进行补偿,提高了光学电流互感器的稳定性和测量结果的准确性。

摘要：旨在建立微滴式数字PCR(ddPCR)检测禽脑脊髓炎病毒(avian encephalomyelitis virus,AEV)的方法,并实现对AEV绝对定量检测。根据已发表的AEV的VP1基因为靶序列,在其保守区域内设计了特异性扩增的引物和探针序列,应用合成的引物和探针建立ddPCR检测AEV方法,并测定其特异性、灵敏性和重复性。结果显示,建立方法的最佳引物终浓度为1.0μmol/L,探针终浓度为0.5μmol/L,退火温度为58℃。特异性测试结果,本方法只检出AEV,没有检出禽流感病毒、鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒、禽呼肠孤病毒、禽偏肺炎病毒和鸡传染性喉气管炎病毒,且无交叉反应。灵敏性结果显示,本方法对pMD18-AEV重组质粒DNA最低检测限为5.9拷贝/μL,敏感性高。用4个连续稀释的pMD18-AEV重组质粒DNA的拷贝数的对数值与ddPCR检测的拷贝数的对数值绘制绝对定量曲线,其曲线呈良好的线性关系(R2=0.9994),结果稳定。3次重复检测结果的变异系数均小于5%,重复性好。对采集的病鸡临床样品65份进行ddPCR和荧光定量PCR检测,结果显示2种方法AEV阳性检出率均为4.62%(3/65)。结果表明,本研究建立的ddPCR方法检测AEV特异性高、灵敏好和稳定可靠,为绝对定量检测AEV提供了技术手段,对有效防控AEV有重要意义。

摘要：介绍了取物机器人的结构特征;应用Pro/E软件建立实体模型,利用ANSYS Workbench有限元分析软件建立了取物机器人的有限元模型;选取机器人的危险姿态,得到在危险姿态下的应力、应变和位移情况,验证了目前的结构设计能够满足要求,并且找出薄弱环节,为取物机器人的进一步优化设计提供理论依据。

摘要：为了研究饲料氧化鱼油对草鱼肠道抗氧化防御能力的影响,以谷胱甘肽/谷胱甘肽转移酶(GSH/GSTs)通路为研究对象,以豆油、鱼油、氧化鱼油为饲料脂肪源分别设计豆油组(6S)、鱼油组(6F)、2%氧化鱼油(2OF)、4%氧化鱼油(4OF)及6%氧化鱼油(6OF)5组等氮、等能半纯化饲料,在池塘网箱养殖草鱼[平均体重(74.8±1)g]72 d。采用荧光定量PCR(RT-QPCR)的方法,测定了草鱼肠道组织中谷氨酸-半胱氨酸连接酶催化亚(GCLC)、谷胱甘肽合成酶(GSS)和谷胱甘肽还原酶(GSR)以及谷胱甘肽S-转移酶的ω1(GSTω1)、PI-谷胱甘肽S-转移酶(GSTPI)和微粒体谷胱甘肽S-转移酶1(MGSt1)的表达活性,并测定了肠道中谷胱甘肽GSH的含量。结果显示,2OF、4OF和6OF组草鱼肠道中GSH/GSTs通路基因表达均上调,其中6F组中MSGT1在肠道中表达显著上调(P<0.05),4OF组中GSR和MGST1在肠道中表达显著上调(P<0.05),6OF中GCLC和MGST1在草鱼肠道中表达显著上调(P<0.05);GCLC表达活性与饲料中MDA含量呈多项式的关系,MGST1表达活性与饲料中AV和(EPA+DHA)呈多项式关系。结果表明,氧化鱼油使草鱼肠道GSH/GSTs通路基因表达活性上调,且GSH/GSTs通路基因表达活性对不同浓度氧化鱼油所引起的肠道氧化损伤具有不同的应对方式。