摘要：目的　将甲型流感病毒核蛋白(NP)基因克隆到原核表达载体进行可溶性融合表达,制备纯化的病毒核蛋白,为制备甲型流感病毒单克隆抗体提供材料。方法　提取甲型流感病毒RNA ,设计引物,RT PCR扩增NP基因,利用基因工程的手段,将甲型流感病毒的NP基因在大肠埃希菌中进行融合表达,并将表达产物进行亲和层析。结果　成功构建了甲型流感病毒NP基因原核表达载体,经亲和层析制备了较高纯度的目的表达产物。结论　通过合理控制发酵时间、生长温度和诱导物浓度,制备了较为理想的可溶性甲型流感病毒核蛋白。

摘要：目的利用荧光定量RT-PCR技术建立一种快速检测A型流感病毒的方法。方法根据A型流感M2基因的相对保守序列分别设计一对引物及其相应的Taqman探针,建立、优化反应体系后,利用十倍稀释法检验方法的灵敏度并建立相对定量标准曲线并与普通RT-PCR法进行比较;特异性检验后进行临床标本的检验。结果A型流感病毒检测反应的灵敏度为2·56×10-6TCID50,标准曲线相关系数为0·999,扩增效率为108·5%,5种非A型流感病毒病原体检测均为阴性,说明此方法具有很好的稳定性、重现性和特异性。结论本研究建立荧光定量RT-PCR技术可以准确检测A型流感病毒,不仅灵敏度高、稳定性好,而且可以对病毒滴度进行定量检测。

摘要：目的利用荧光定量RT-PCR技术建立快速检测甲型流感病毒N2亚型的方法。方法根据N2亚型流感病毒HA基因的相对保守序列,分别设计一对引物及其相应的Taqman探针,利用一步法RT-PCR试剂盒建立、优化反应体系后,采用十倍稀释法检验建立体系的灵敏度并建立相对定量标准曲线;采用N1亚型毒株核酸进行方法特异性检验并对临床疑似流感样病例样本进行检测。结果N2亚型流感病毒的检测灵敏度为2.56×10-6,扩增效率为99.9%,标准曲线r=0.997,特异性为100%。临床ILI样本检测结果与HAI鉴定结果相符。结论本研究建立的荧光定量RT-PCR技术可以快速、准确的检测N2亚型流感病毒。

摘要：目的利用荧光定量RT-PCR技术建立一种快速检测A型流感病毒的方法。方法根据A型流感M基因的相对保守序列分别设计一对引物及其相应的Taqman探针,建立、优化反应体系后,利用10倍稀释法检验方法的灵敏度并建立相对定量标准曲线;特异性检验后利用临床标本与传统的血凝抑制法进行比较。结果A型流感病毒检测反应的灵敏度为2.56×10-6TCID50,标准曲线相关系数为0.999,扩增效率为108.5%,5种非A型流感病毒病原体检测均为阴性,说明此方法只有很好的稳定性、重现性和特异性。结论本研究建立荧光定量RT-PCR技术可以准确检测A型流感病毒,不仅灵敏度高、稳定性好,而且可以对病毒滴度进行定量检测。

摘要：目的建立一种新型的双重荧光PCR诊断方法，用于B型流感病毒By（B／Yamagata）和Bv（B／Victoria）亚系的准确分子分型。方法从GenBank随机下载By和By HA（hemagglutinin）基因各50条序列，通过MEGA分析，利用Primer Primer软件设计亚系特异性引物和通用探针，建立双重荧光PCR诊断方法。用HAI（hemagglutination inhibition）实验确认的B型流感病毒亚系分离毒株和A型流感病毒进行特异性验证，用体外转录核酸拷贝数进行灵敏度实验。结果2006--2010流感监测年份，对17765份流感样病例咽拭标本中分离到B型流感病毒793株，本方法鉴定有152株By和641株Bv病毒，与HAI鉴定结果一致。本诊断方法的检测特异性达100％，灵敏度达102拷贝／μl，重复性变异系数〈3．5％。结论本研究所建立的荧光PCR方法为流感实时监测提供了有力的技术支撑，适合于流感监测实验室对流感病毒的快速分子诊断。

摘要：目的建立一种利用双碱基延伸法与荧光偏振技术(Fluorescence polarization,FP)快速检测甲型H1N1流感病毒NA基因耐药突变位点的新方法。方法从GenBank随机下载30条甲型H1N1的NA(neuraminidase)基因序列,通过MEGA分析,利用Primer Premier软件设计3条特异引物,其中一对引物通过RT-PCR用于扩增含有耐药位点H275Y的NA基因,第3条引物是应用双碱基延伸终止法与荧光偏振技术检测NA基因对达菲类药物耐药位点H275Y的突变情况,再随机选取50株甲型H1N1流感病毒进行检测,与测序结果进行比对,验证检测结果的准确性。结果 50株甲型H1N1流感病毒的NA蛋白第275位氨基酸均为组氨酸,未发生H Y的替换,在灵敏度与特异性方面,与传统的基因测序结果一致性均达100%。结论本方法操作简便、敏感性及特异性高、判读结果直观明确、检测费用低,能实现对耐药位点突变的快速、准确检测,可应用于与SNP相关疾病的快速分型和突变位点的实时监测和临床检测。

摘要：目的　建立特异、敏感、快速、同步检测含漱液中A、B型流感病毒的分子生物学检测方法。　方法　以流感病毒A型保守的M基因和流感病毒B型的NS基因为模板分别设计的两对引物 ,用MRT -PCR同时扩增A型M基因和B型NS基因的片断 ,得到相对应的病毒片段 ,根据扩增出的片段的位置和大小来判断含漱液中A、B型流感病毒分型。　结果　用MRT -PCR从 19株A型流感病毒毒株和 11株B型流感病毒毒株分别特异地扩增出M基因 5 0 1bp的片段和NS基因 13 6bp的片段 ,灵敏度可达 1 6× 10 -5TCID5 0 ;对 2份黑天鹅的咽拭子和肺组织标本均检出A型流感病毒M基因 5 0 1bp的片段。　结论　多重逆转录聚合酶链反应能特异、敏感快速的检测A、B型流感病毒。

摘要：目的了解2010-2012年深圳市B型流感的流行状况,应用单碱基延伸终止荧光偏振法快速诊断,为制定预防控制措施提供依据。方法从GenBank随机下载By和Bv HA基因,通过MEGA分析,利用Primer Premier软件设计特异引物和通用探针,应用单碱基延伸终止法与荧光偏振技术对流感哨点监测医院随机采集流感样病例的咽拭子或咽漱液标本进行快速检测,用HA（IHemagglutination inhibition）实验确认的B型流感病毒亚系分离毒株进行特异性验证。结果 2010-2012年共采集并检测流感样病例咽拭子4 630份,快速诊断B型流感病毒阳性189例,与HAI分离并鉴定结果一致,总阳性率为4.08%;以2012年第7周阳性率最高,达51.61%;病毒阳性者平均年龄为（13±15）岁,其中小于10岁组的阳性率最高,达4.70%。结论 2010-2012年深圳市B型流感病毒的监测中,Victoria亚型为主要流行株。深圳B型流感病毒主要累及青少年和老年人群。应继续加强监测工作,并在流行季节及时采取预防控制措施以保护公众的身体健康。

摘要：目的利用荧光定量RT-PCR技术建立快速检测流感病毒N1、N2亚型的方法。方法根据N1、N2亚型流感病毒NA基因的相对保守序列,设计两对引物及其相应的Taqman探针,利用一步法RT-PCR试剂盒建立、优化反应体系后,采用十倍稀释体外转录RNA检验建立体系的灵敏度和重复性并建立相对定量标准曲线;利用多种流感病毒和具有相似临床症状的呼吸道病毒检验建立体系的特异性。结果 N1、N2亚型流感病毒的检测灵敏度为10拷贝/μl,扩增效率分别为102.21%和101.78%,标准曲线相关系数大于99%,重复性良好,特异度实验未发现有非特异性扩增。结论双重荧光定量RT-PCR技术可以快速、准确的检测N1、N2亚型流感病毒。

摘要：目的为科学有效地预警流行性感冒(流感)的爆发和流行,制定符合深圳市的流感监测基线和警戒曲线。方法收集深圳市第一人民医院、深圳市妇幼保健院2003-2006年的流感监测资料,以周为单位,对流感样病例百分比IL(I%)进行统计分析,以确定基线和警戒曲线。结果深圳市流感监测结果可靠,基线值为5.95%,警戒曲线具有较好的灵敏度和季节性,能及时发现异常值。结论深圳市的流感监测参考线具有较好的灵敏性和季节性,能起到一定预警作用。