摘要：动物免疫学实验课程是理论学习必要的补充,通过相关实验项目可以帮助学生对理论知识的理解,激发学生学习热情。教学实践表明:与传统教学模式相比较,综合设计性实验教学模式更有助于学生对理论知识的学习,更有利于学生实践能力的锻炼,符合当代培养具有创新思维专业人才的社会发展需要。

摘要：为研究温和气单胞菌(***)溶血素基因的特性,本研究根据GenBank登录的气单胞菌属溶血素基因序列设计一对引物,经PCR扩增得到大小约1.5 kb的*** RC-07-KA株溶血基因片段,将该片段克隆到pGEM-T载体,测序结果显示:溶血素基因片段大小为1 467 bp,编码487个氨基酸残基,遗传进化分析结果表明该基因与气单胞菌属中的***菌株Sb(AY611033)、NLEP A-1607(AF410466)、AEF(HM853019),***菌株357(AY157998)、人源分离株(EF620533)和***菌株17-2(X65048)的溶血素基因亲缘关系较近,同源性大于95%,而与其他菌株的同源性较低。通过构建溶血素重组表达质粒pET-Hly,诱导表达并通过western blot鉴定表达蛋白,结果显示重组菌能高效表达重组溶血素,而且纯化的重组溶血素具有溶解鲤鱼红细胞的活性。为该菌进一步深入研究奠定了基础。

摘要：本研究旨在针对新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)建立两种快速、敏感、特异的荧光定量PCR诊断方法并对其临床实用性进行比较。试验根据呼肠孤病毒S1基因序列设计合成1对特异性引物和1条MGB探针,分别建立TaqMan和SYBR GreenⅠ两种荧光定量PCR检测方法,并对两种方法的特异性、灵敏性、重复性进行比较。结果显示,两种检测方法标准曲线的相关系数均为0.999,对鸭细小病毒(DPV)、A型鸭甲肝病毒(DHV-1)、C型鸭甲肝病毒(DHV-3)、鸭传染性支气管炎(IBV)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)、鹅星状病毒(JSHV)的检测结果均为阴性,特异性良好。SYBR GreenⅠ法的最低检测限度为10;拷贝/μL,TaqMan法的最低检测限度为10;拷贝/μL,前者的灵敏度比后者高10倍。SYBR GreenⅠ法和TaqMan法重复性试验的组内和组间变异系数均分别小于2.1%和1.8%。利用这两种方法对临床30份疑似病料进行检测,其中TaqMan法检出29份,SYBR GreenⅠ法检出30份,符合率为97%。综上,两种荧光定量方法均可用于临床NDRV的检测,尤以SYBR GreenⅠ法灵敏度更高。

摘要：海藻糖比伯斯坦菌(Bibersteinia trehalosi)为山羊重要致病菌,吸收宿主铁离子是其毒力发挥的重要途径,铁结合蛋白A(ferric binding protein A,FbpA)在铁吸收中起着重要作用。本研究对海藻糖比伯斯坦菌fbpA基因进行了分子进化分析,结合分析结果设计引物对其进行克隆、表达,并根据FbpA氨基酸序列进行结构预测。结果显示,山羊源海藻糖比伯斯坦杆菌fbpA基因大小为1026 bp,编码341个氨基酸,蛋白相对分子质量约为37 kDa;分子进化分析显示,山羊海藻糖比伯斯坦杆菌fbpA与溶血性曼氏杆菌和副猪嗜血杆菌fbpA相似性最高,与猪胸膜肺炎放线杆菌fbpA相似性较低;结构预测分析显示,山羊海藻糖比伯斯坦杆菌FbpA蛋白的第164,221,222位酪氨酸,第32,84位精氨酸以及第33位谷氨酰胺为可能的Fe^(3+)结合位点。结果表明山羊源海藻糖比伯斯坦菌FbpA可能有铁离子结合位点,与预期相符,为后续结构测定提供了理论支持。

摘要：鹅源星状病毒(goose astrovirus, GoAstV)是国内新发雏鹅痛风病病原,为更好地应用于临床检测,本试验针对GoAstV分别建立了基于TaqMan探针和SYBR GreenⅠ染料的2种实时荧光定量PCR方法,并比较两者的优劣。首先根据GoAstV的ORF1b基因保守序列设计特异性引物和探针,通过优化反应条件和反应体系,分别建立TaqMan和SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,并对其进行特异性、敏感性、重复性测定和临床样品检验。结果显示,2种方法均能特异性检测GoAstV,Ct值在质粒标准品浓度2.5×10~2~2.5×10~8 copies/μL范围内线性关系良好,相关系数均为0.999;探针法和染料法的最低检测限分别为2.5×10~1,2.5×10~2 copies/μL;2种方法重复性试验组内与组间变异系数均小于2.50%。对近1年收集的71份临床疑似样本进行检测,探针法和染料法的阳性检出率分别为49.30%和42.25%,探针法的检出率较高。结果表明,本试验建立的TaqMan探针和SYBR GreenⅠ染料荧光定量PCR方法均具有特异性强、敏感性高、重复性好优点,可应用于临床GoAstV的检测,其中尤以TaqMan探针法的灵敏度较高。

摘要：为获得牛源麦氏弧菌重组碱性丝氨酸蛋白酶(ASP),笔者扩增并构建了以麦氏弧菌FD39-1的ASP基因为插入片段的重组表达质粒p ET32a-ASP,将该质粒转化至大肠杆菌Rosetta中诱导表达并纯化,采用SDS-PAGE与Western-blot技术检测目的蛋白是否表达成功。结果显示,扩增的ASP基因与GenBank中相应基因序列(Kp126900.1)的同源性达100%。ASP基因在大肠杆菌中成功表达,表达蛋白相对分子质量大小约为58 ku,与预期一致。Western-blot显示在预期位置出现阳性条带。本研究为麦氏弧菌ASP的生物学特性与亚单位疫苗的制备奠定了基础。