摘要：目的 将环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）方法应用于食品中单核细胞增生李斯特菌的检验,并在检测方法特异性、灵敏度等方面与实时荧光PCR和传统方法进行比较.方法 针对单核细胞增生李斯特菌hly溶血素基因设计LAMP引物,应用LAMP方法对88株单核细胞增生李斯特菌、1株单核细胞增生李斯特菌参考菌株ATCC 15313、33株非目标菌进行检测；并进行食品基质添加实验及对样品进行检测,同时应用实时荧光PCR方法和ISO 11290-1方法进行平行检测.对3种检测方法的特异性、灵敏度、检测低限及实际样品检验的结果进行比较.结果 LAMP和荧光PCR对89株单核细胞增生李斯特菌的检验结果均为阳性（100％,89/89）,33株非目标菌的检测结果均为阴性（100％,33/33）.LAMP方法的检测灵敏度为2×102 CFU/ml,与实时荧光PCR方法（2×102 CFU/ml）相同,且优于ISO 11290-1方法（2×104 CFU/ml）.食品基质添加实验结果显示,3种检测方法的检测低限均为3 CFU/25 g样品.实际食品样品检测结果显示,3种方法单核细胞增生李斯特菌的检出率均为4％（2/45）.结论 本研究建立的单核细胞增生李斯特菌LAMP检测方法具有良好的特异性,检测灵敏度与实时荧光PCR相当,适用于单核细胞增生李斯特菌的快速筛选.

摘要：目的:建立食品过敏原芥末成分环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,并与实时荧光-聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测方法比对。方法:针对白芥的主要过敏原基因Sin A1,设计LAMP引物并建立反应体系,在特异性和灵敏度方面与RT-PCR检测方法比对。结果:建立的LAMP检测方法,经特异性验证,与所测试的13种植物,无交叉反应。通过添加实验,方法的检测灵敏度为0.5%,与RT-PCR方法检测灵敏度相当。检测了25份实际样品,检测结果与RT-PCR检测结果一致。结论:建立的食品过敏原芥末成分LAMP检测方法简单经济,检测结果可靠,可有效缩短检测时间,适用于芥末过敏原成分的检测,具有良好的应用前景。

摘要：目的将环介导等温扩增检测方法应用于食品中沙门菌的检验,并在检测方法特异性、灵敏度等方面与实时荧光PCR和传统检测方法进行比较。方法针对沙门菌属高度保守的fimY基因设计环介导等温扩增检测引物并优化反应体系,在特异性、灵敏度和实际样品检测等方面与实时荧光PCR及传统检测方法比对。结果本研究建立的LAMP方法检测沙门菌93株和非目标菌31株,具有良好的特异性。在纯培养、无需增菌情况下,其检测灵敏度为6.4×102cfu/ml,与实时荧光PCR方法相当。食品基质添加试验中,环介导等温扩增方法检测低限为2 cfu/25 g样品;对45份实际食品样品检测结果表明,该方法实际样品检出率为11.1%,与实时荧光PCR及传统方法检测结果一致。结论本研究建立的沙门菌环介导等温扩增检测方法具有良好的特异性,检测灵敏度与实时荧光PCR相当,适用于沙门菌的快速筛选。

摘要：目的拯救嵌合GV1001的重组溶瘤流感病毒株,并通过体内外实验全面评价其选择性杀伤肝癌的效果。方法将编码GV1001肽的碱基序列串联重复3次序列优化设计后插入到A/PuertoRico/8/34(PR8)病毒的NA片段。采用反向遗传学技术,重组质粒pOV-GV1001-NA与pHW191-PB2、pHW192-PB1、pHW193-PA、pHW194-HA、pHW195-NP、pHW197-M、pHW198-NS PR87个质粒共同转染COS 1/MDCK细胞,拯救得到重组溶瘤病毒rOV-GV1001-NA。经过血凝实验、TCID_(50)、PCR、透射电镜、细胞免疫荧光等鉴定,流式细胞术检测rOV-GV1001-NA诱导肝癌细胞死亡的方式,进一步通过肝癌H22细胞小鼠皮下荷瘤模型评价rOV-GV1001-NA体内溶瘤效果。结果重组溶瘤病毒rOV-GV1001-NA血凝效价为2^(9),病毒滴度达5 LogTCID_(50)/ml,并可在SPF鸡胚中稳定传代;电镜观察形态大小符合流感病毒特点;细胞免疫荧光证明GV1001成功插入并表达;细胞凋亡实验表明rOV-GV1001-NA可选择性诱导肝癌细胞凋亡;肝癌小鼠皮下荷瘤模型证实rOV-GV1001-NA可显著抑制肿瘤生长,延长小鼠生存期,且具有剂量依赖性。结论利用反向遗传学技术成功构建了武装GV1001的重组溶瘤流感病毒,体内外实验表明rOV-GV1001-NA能够靶向杀伤肝癌细胞而对正常细胞无明显影响,该结果将为肿瘤疫苗研究提供新思路,有望为肝癌临床治疗开辟新途径。

摘要：目的建立食品过敏原牛奶成分LAMP(loop-mediated isothermal amplification)检测方法,并与实时荧光PCR(real-time PCR)检测方法比对。方法针对牛线粒体细胞色素b(cyt-b)基因设计LAMP引物并建立反应体系,在特异性和灵敏度方面与real-time PCR检测方法比对。结果本研究建立的LAMP方法检测9份不同品牌的牛奶和羊奶及其加工制品,没有出现交叉反应,具有良好的特异性。该方法的检测灵敏度为0.5%,与real-time PCR方法检测灵敏度相当。检测了69份实际样品,检测结果与real-time PCR检测结果一致。结论本研究建立的食品过敏原牛奶成分LAMP检测方法简单经济,检测结果可靠,可有效缩短检测时间,适用于过敏原牛奶成分的检测,具有良好的应用前景。