摘要：根据GenBank中鸭IFN-α基因（GenBank登录号：JF894229）序列设计并合成引物,并以鸭β-actin基因（GenBank登录号：GU564232）为内参,采用SYBR Green I染料法,建立检测鸭IFN-αmRNA的实时荧光定量Real-time PCR方法（RT-PCR）。将IFN-α和β-actin基因分别克隆至pMD18-T载体上,鉴定出阳性重组质粒为标准品（p-IFN-α和p-β-actin）,分别建立番鸭IFN-α和β-actin实时荧光定量RT-PCR方法。结果表明,Ct值在13.27~27.54与11.86~25.32范围内呈现良好的线性关系,相关系数均大于0.99（r〉0.99）,扩增产物的熔解曲线分析均各自只出现1个特异性单峰,无引物二聚体,Tm值分别为（93.6±0.26）℃和（85.3±0.15）℃,最低检测限分别为9.37×102copies/μL和3.71×101copies/μL,检测周期从样品的处理到荧光定量PCR结束仅需4 h左右。本研究建立的鸭IFN-α基因实时荧光定量PCR灵敏度高、特异性强、检测周期短,为番鸭IFN-αmRNA的定量分析奠定了基础。

摘要：为了解近期鸭疫里默氏菌的血清流行病学,明确鸭疫里默氏菌的敏感药物,本研究根据鸭疫里默氏菌的gyrB基因序列设计检测引物,建立PCR检测方法,并对收集的2006~2012年间福建省及邻近省份的疑似鸭疫里默氏菌病死亡鸭、鹅,进行细菌分离,PCR鉴定,凝集试验确定血清型,纸片法分析药物敏感性。该PCR法具有较好的特异性,检测敏感性可达102~103CFU/mL。分离鉴定鸭疫里默氏菌423株,分属于1、2、3、6、10、11、13、14、17型和未知型,2型、11型、1型和17型合计占所有菌株数量的86.4%。50%以上分离菌株敏感的药物有氟苯尼考、头孢拉定、头孢氨苄、阿莫西林、头孢唑啉和壮观霉素。

摘要：利用新兴的环介导等温扩增技术,建立了一种灵敏、特异、快速的体外环介导等温扩增检测方法。针对鹅细小病毒VP3基因的8个位点设计了6条特异性引物,建立了一种快速检测鹅细小病毒的LAMP方法。试验结果表明LAMP方法在恒温65℃水浴下50min内即可完成GPV的检测,且其检测灵敏度达150pg.μL-1;与其他常见的病毒无交叉反应。以钙黄绿素和Mn2+作为荧光指示剂,可快速、直观判定反应结果,可见该方法为适合基层及现场快速检测、实用灵敏的分子生物学方法。

摘要：森林涵养水源的能力与林分结构有密切关系,森林内成层性越复杂、植被越丰富,其涵养能力越强,混交林能够充分利用地上与地下营养空间。提高林地生产率和总生物量,丰富生态系统的生态位和生物多样性,通过不同的混交造林设计,不但能明显增强其水源涵养功能,同时增加了流域的生态系统和景观多样性,使群落更加稳定,其生态效益、社会效益和经济效益都会明显增强。

摘要：营业税在平衡地方经济可持续发展中起到了重要的作用,但多年的实践也越来越明显地暴露出营业税的弊端,因此营业税税制的改革势在必行。本文针对我国现行营业税税制存在的问题,对营业税改革进行了方案设计,认为保险业继其他服务业之后实行＂营改增＂是大势所趋,并通过中国平安保险公司2009~2011年的报表数据深入分析了营业税改革对保险业企业税负的影响。

摘要：参照GenBank上登录的黄病毒科黄病毒属NS5基因片段序列设计引物,建立能检测引起鸭出血性卵巢炎病毒的RT-PCR方法。该方法能从鸭出血性卵巢炎病毒扩增出1条约470 bp的特异性片段,从H9亚型禽流感病毒、鸭呼肠孤病毒、鸭瘟病毒、鸭肝炎病毒、鸭源禽Ⅰ型副粘病毒均不能扩增出目的片段;敏感性试验显示建立的RT-PCR方法最低可检出20 pg病毒核酸。以上结果表明建立的RT-PCR方法具有较好的特异性、敏感性和准确性,可用于该病的临床诊断和流行病学调查。

摘要：根据GenBank登录的鸡新城疫病毒NP基因序列设计引物,利用RT-PCR对F48E9强毒株NP基因进行扩增,将扩增产物经纯化后连入pMD18-T载体,通过PCR和酶切鉴定出阳性重组质粒,经测序后获得F48E9 NP基因序列。经分析发现该基因的ORF总长为1 470 bp,编码489 aa,NP蛋白有4个高度保守的Cys位点,分别位于第55、78、139、213位,且在401～440位和461～481位区域变异较大。将F48E9株与19株参考毒株的相应序列进行比较得到核苷酸序列同源性为87.9%～92.3%,氨基酸序列同源性较高,为92.2%～98.0%,遗传进化分析表明F48E9株相对独立,与参考毒株的遗传距离较远。

摘要：针对H9亚型禽流感HA基因保守序列设计引物,建立基于SYBR GreenⅠ检测模式的荧光定量RT-PCR（real-ti me RT-PCR,RRT-PCR）,最低检测限为8.33×102拷贝质粒DNA,与常规PCR相比,灵敏度高出100倍。扩增产物的熔解曲线分析只出现1个单特异峰,无引物二聚体,Tm值为（83.83±0.22）℃,组内变异系数为0.52%~1.48%,组间变异系数为0.71%~2.21%,可重复性好;对H5亚型禽流感病毒、鸭肝炎病毒、鸭瘟病毒、鸭源禽1型副粘病毒无扩增;检测速度快,从样本处理到报告结果仅需4.5 h。

摘要：一、问题的提出单元复习课较新授课难上,这是数学教师普遍的共识.一方面难在“旧知识,无新意”,另一方面难在“内容多,时间少”.对于常采用的讲练结合复习模式,虽然兼顾到知识点复习和知识应用训练,但就知识点练习知识点的形式,割裂了知识内在的逻辑联系,抑制了数学知识本身具有的生长力及对重点知识的拓展,以至于变换情境之后学生便无法有效解决类似或相关的问题.

摘要：根据连接酶依赖PCR工作原理设计并建立一种禽坦布苏病毒RT—PCR快速检测方法。结果显示，该方法能特异性检测不同禽源的坦布苏病毒分离株，且与常规RT—PCR检测敏感性相当。运用该方法对动物攻毒试验采集的6份样品及2011～2012年间采集自福建、江西、浙江及广东省发病鸭场的140份样品进行检测。动物试验样品均为阳性，临床样品检出率为14．3％（20／140）。试验结果表明，本试验所建立的连接酶依赖RT—PCR方法具有快速、敏感、特异等优点，可用于禽坦布苏病毒的流行病学调查及病毒检测。