摘要：目的构建一种新型双启动子表达载体pCMVnir,研究其与胞内寄生菌联合应用促进基因免疫效果的作用。方法细菌硝酸盐还原酶基因B启动子nirB为厌氧诱导启动子,根据nirB启动子的结构,设计合成改良的nirB,置换三启动子载体pTriEx4中的T7Lac和P10启动子,而保留其CMVie启动子,获得携带CMVie和nirB双种启动子的新型载体pCMVnir,或称为pCN。构建pCNEGFP和pCNDsRed两种报告质粒,分别转化***3261、***5α和CHO等细胞,检测报告基因的表达情况以确定两种启动子的活性。pCNEGFP转化***3261,接种BALBc小鼠,定期解剖小鼠收集黏膜相关淋巴组织,观察重组细菌和载体DNA在细胞中的定植及稳定性。免疫接种小鼠,并定期收集小鼠血清和阴道分泌物,以重组rEGFP为抗原,用ELISA方法研究其增强免疫应答的能力。并构建人乳头瘤病毒L1E7双启动子pCN16L1E7及对照单启动子载体pCMV16L1E7和pNir16L1E7,对比三者诱导黏膜免疫的差别。结果双启动子表达载体pCMVnir可在细菌和真核细胞中有效表达报告基因,在细菌中可形成肉眼可见的荧光菌落和沉淀,转染CHO等真核细胞能够表达荧光蛋白,表明pCMVnir载体的两种启动子都有活性,其中nirB活性是受兼性厌氧调控的。pCMVnir与细菌有较好的相容性,重组细菌可在动物体内有限复制和定植达6周,质粒可在细菌中稳定存在。以rEGFP为抗原检测发现pCNEGFP诱导的免疫反应高于常用的单启动子载体pCMVEGFP。人乳头瘤病毒双启动子载体pCN16L1E7诱导的免疫反应也高于其他单启动子载体。结论双启动子表达载体pCMVnir与减毒胞内寄生菌匹配应用,能够提高抗原表达量及增强基因免疫反应的强度。并可作为一般基因克隆和表达载体,特别是作为原核表达载体,不用添加诱导物,即可获得大量表达。

摘要：为提高卵巢癌的化疗效果 ,提高患者的生存率 ,设计了一种新型的化疗方法—持续腹腔冲洗化疗法。将 2 9例卵巢上皮癌患者随机分为持续腹腔冲洗组 (WIP组 ,14例 )和常规腹腔化疗组 (CIP组 ,15例 )。 WIP组腹腔化疗时首先注入生理盐水 2 0 0 0 m l+顺铂 (CDDP) 70 mg/m2后放开出液管 ,继以生理盐水 5 0 0 ml+CDDP17.5 mg/m2进行持续腹腔冲洗化疗 ,每 2小时 1瓶 ,进出液保持平衡 ,治疗总时间为 12小时 ,CDDP总入量为 175 m g/m2 。结果 WIP组 CR+PR率为 4 3% ,CIP组为 13% ,P0 .0 5 ) ,患者也可耐受。