摘要：目的:研究沉默丙酮酸激酶M2型(PKM2)对藤黄酸(GA)诱导人前列腺癌PC3细胞凋亡的影响,并探讨其潜在的作用机制。方法:设计并合成针对PKM2的3条特异性siRNA及阴性对照siRNA(si-NC)。利用脂质体将PKM2 siRNA和si-NC转染至人前列腺癌PC3细胞并检测PKM2 siRNA的沉默效率。MTT和吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)双重染色法分别检测沉默PKM2后GA对PC3细胞生长活性和凋亡的影响。采用实时荧光定量PCR和Western印迹法分别检测c-myc和cyclin D1的mRNA和蛋白表达水平。结果:与si-NC组比较,3条PKM2 siRNA都能够有效下调PKM2的mRNA和蛋白表达水平,其中PKM2 siRNA-1的沉默效率最高。转染PKM2siRNA-1 24 h后,PC3细胞中PKM2 mRNA和蛋白表达水平分别下调70%和85%(P<0.05)。转染PKM2 siRNA-1后给予0.5μmol/L的GA处理24 h,PC3细胞生长活性明显受到抑制(对照组的68%)且凋亡诱导增加,而且c-myc和cyclin D1基因的mRNA和蛋白的表达水平显著下调(c-myc分别为对照组的50%和35%;cyclin D1分别为对照组的60%和20%,P<0.05)。结论:抑制PKM2能够提高GA诱导人前列腺癌PC3细胞凋亡的敏感性,PKM2可能成为GA治疗前列腺癌的有效增敏靶点。

摘要：目的 研究非对称小干扰RNA（asymmetric structure of interfering RNA,aiRNA）沉默泛素特异肽酶22（ubiquitin specficpeptidase 22,USP22）基因对膀胱癌EJ细胞增殖的影响及其相关机制.方法 2010年8月至2012年3月,我们设计并合成USP22 aiRNA及阴性对照aiRNA（NC-aiRNA） USP22 aiRNA序列结构包括长度分别为15 bp和21 bp的正义链和反义链,将此aiRNA命名为USP22 aiRNA（15/21）,利用脂质体转染膀胱癌EJ细胞.实验分3组：对照组、NC-aiRNA组和USP22 aiRNA（15/21）组转染后48 h,通过逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western印迹法分别检测USP22、Myc、cyclin D1和cyclin E1基因mRNA和蛋白表达水平,噻唑蓝（MTT）法检测EJ细胞的增殖活性,荧光素酶报告基因检测系统检测Myc启动子活性 利用染色质免疫共沉淀法（chromatin immunoprecipitation,ChIP）分析沉默USP22基因后转录因子Sp1与Myc基因启动子的结合情况结果 与对照组相比,转染USP22 aiRNA（15/21） 48 h后EJ细胞中的USP22、Myc、cyclin D1和cyclin E1的mRNA和蛋白表达水平分别下调了（87.4±5.2）％和（91.2±7.3）％、（69.2±4.3）％和（61.0±6.6）％、（78.5±4.1）和（67.4± 5.5）％、（81.0±5.5）％和（78.3±4.0）％（P＜0.05）.MTT结果显示,USP22aiRNA（15/21）组EJ细胞的增殖活性明显受到抑制,在24、48、72和96h4个时间点的细胞生长活性分别为（85.4±5.7）％、（71.3±8.4）％、（52.5±6.7）％和（45.8±6.4）％（P＜0.05）.荧光素酶报告基因检测结果显示,USP22 aiRNA（15/21）组Myc启动子的转录活性下调（65.5±4.2）％（P＜0.05）.ChIP结果进一步显示,沉默USP22抑制了转录因子Sp1与Myc启动子的结合,USP22 aiRNA（15/21）组Sp1与Myc启动子的结合能力相比对照组下调了（48.0±3.2）％（P＜0.05）.结论 USP22 aiRNA（15/21）可能通过抑制Myc基因启动子与转录因子Sp1的结合,下调Myc的表达,从而抑制膀胱癌EJ细胞的增殖.

摘要：目的探讨清热利湿中成药宁泌泰胶囊在上尿路结石术后促进排石及并发症治疗方面的效果。方法采用随机平行对照研究。2016年10月至2018年3月于武汉市第一医院、武汉市第二医院、武汉市第三医院、武汉市普爱医院纳入上尿路结石外科治疗术后有残余结石的患者，按1：3的比例随机分为对照组和宁泌泰组。对照组按需给予抗菌药物或双氯芬酸钠栓剂治疗，宁泌泰组在对照组用药基础上加用宁泌泰胶囊（4粒次，3次／d，口服）。观察期限为自纳入至满12周止，期间观察残余结石的排出时间、排净时间、结石排净率，并比较两组术后并发症如疼痛、感染的情况。组间定量资料的比较采用成组设计的两样本比较的t检验，分类资料的比较采用χ2检验。结果共纳入符合标准的患者269例（武汉市第一医院86例，武汉市第二医院69例，武汉市第三医院58例，武汉市普爱医院56例），患者随机分为对照组66例，宁泌泰组203例。宁泌泰组结石排出时间[（4．5±0．4）d比（7．5±1．3）d，t=2．877，P=0．004]排净时间[（13．6±1．0）d比（25．6±3．8）d，t=4．252，P=0．000]均短于对照组。治疗4周后，宁泌泰组结石排净率高于对照组（91．6％比68．2％，χ2=2．57，P：0．000）。治疗12周后，对照组患者总有效率为89．4％，宁泌泰组总有效率为99．5％，差异有统计学意义（χ2=17．65。P=0．000）。宁泌泰组镇痛患者比例低于对照组（16．3％比30．3％，χ2=6．212，P=0．013），术后4周的尿常规白细胞转阴率高于对照组（88．2％比71．2％，χ2=10．67，P：O．001）。两组患者均未见明显不良反应。结论宁泌泰胶囊可促进术后残余结石的排出，提高残余结石排净率．有助于结石术后疼痛、感染等并发症的预防和治疗。