摘要：在获得可分泌表达α 半乳糖苷酶基因工程毕赤酵母菌株的基础上 ,尝试了基因工程α 半乳糖苷酶在 5L发酵罐中的表达以及从发酵液中纯化α 半乳糖苷酶的研究。在 4L无机盐培养基中接种 0 .4LpPIC9K Gal GS115培养物 ,最终得到 3 .5L发酵液。离心所得上清中总蛋白含量为 2 .1g L。根据发酵液中目的蛋白含量高、杂质少等特点 ,设计了如下的纯化流程 :离心→超滤→阳离子交换层析→脱盐→浓缩。纯化后电泳银染结果呈单一蛋白带 ,总回收率 41%。通过测定米氏常数等生化性质对重组酶进行鉴定后 ,完成了人B型红细胞的酶解实验。结果表明 ,从发酵液中纯化的α 半乳糖苷酶可将B型红细胞改造成O型红细胞。本研究同时在数量和质量上为α 半乳糖苷酶在众多领域的广泛应用奠定了基础。

摘要：B→O血型改造在平战时紧急条件下的输血方面具有重大意义。解放军军事医学科学院章扬培教授课题组利用基因工程,成功实现了B型血向O型血的转变,从而使国内的血型改造研究获得重大突破。为实现B→O血型改造过程的标准化、自动化,研制了一套B→O血型改造装置,实现了B→O血型改造工艺的自动化,将单次血型改造时间缩短到了手工操作的1/4,并且实现了工艺流程的标准化和密闭性,在使用一次性无菌管路耗材的情况下,从外部条件上满足了B→O血型改造结果用于临床的要求,为B→O血型改造在临床上的广泛推广奠定了基础。文章重点介绍了B→O血型改造装置控制系统的研制情况,包括软件及硬件系统的设计。该控制系统为 B→O血型改造过程提供了一种安全、高效的途径。

摘要：确定肝细胞生长因子 (HGF)、巨噬细胞刺激蛋白 (MSP)各 4个Kringle结构的共有序列并以此为基础设计公用引物 ,利用此公用引物可扩增出含不同数目Kringle的系列片段 ;以不同的组合方式连接 ,得到了系列缺失体和嵌合体 ;测序结果表明公用引物的简并性及所扩增序列与理论预期一致 .对以此法所构建的HGF/MSPK1缺失体表达后进行活性测定 ,提出MSP的K1是重要的功能决定区 .此外 ,提出了对内部存在引物酶切位点的cDNA片段的克隆策略 .

摘要：为实现B→O血型改造过程的标准化、自动化,研制了一套B→O血型改造装置。重点介绍了B→O血型改造装置控制系统的研制,包括软件及硬件系统的设计。该控制系统为B→O血型改造过程提供了一种安全、高效的途径,为B→O血型改造在临床上的广泛应用奠定了基础。

摘要：目的建立B→O血型转换红细胞(通用型红细胞)批量制备工艺,为临床提供通用型红细胞制品。方法用不同pH值的缓冲液对1个使用单位(200ml)的B型红细胞进行预处理。在专门设计的转型密闭处理系统中,用α半乳糖苷酶对B型红细胞表面B抗原进行酶解,并检测酶解后红细胞ABO血型抗原及结构、功能。结果酶解前用pH4.2缓冲液预处理组上清游离Hb含量显著低于pH2.8缓冲液处理组;经α半乳糖苷酶(100Uml红细胞)在pH5.6,26℃条件下酶解60min,红细胞B型抗原被完全清除,转换为O型;红细胞形态、变形性、ATP、2,3DPG、胆固醇含量、乙酰胆酐酯酶活性、渗透脆性、pH、上清游离Hb、K+、Na+含量与对照组(正常红细胞)比较差异无显著意义,均在正常范围。结论建立了B→O血型转换通用型红细胞的批量制备工艺。通用型红细胞结构、功能、形态均正常,细菌、热原实验合格。

摘要：现代肿瘤免疫学认为,MHC分子在肿瘤表面表达很少或不表达,肿瘤抗原不能被有效地加工和提呈,因而不能有效地激发肿瘤免疫排斥反应,是肿瘤发生的一个重要因素。据此,我们将MHC基因导入肿瘤细胞,使其在肿瘤细胞表面表达,纠正肿瘤细胞对抗原加工和提呈的缺陷,提高肿瘤的免疫原性,以达到增强肿瘤免疫的目的。 首先,根据文献报道的Ⅰ-A^K基因α、β链的DNA顺序,设计了各自的一对引物,采用RT-PCR技术。