摘要：宁波是国家历史文化名城,宁波的城墙文化历史也十分悠久。文章以宁波六大古城门之一的长春门为例开展研究,通过对长春门历史的考察以及对周边环境的探索,设计以长春门为基础的文化公园,对长春门地块进行城市更新,探讨长春门文化公园设计的可能性。作为南塘老街打通历史链接的关口,长春门文化公园的建设串联起了重要的历史文化节点和文化街区,让历史文脉绵延相传、传统与现代交相辉映,提升了文化街区的品质。

摘要：城市闲置土地对环境会产生多方面不利影响。对这些土地的临时性、灵活性使用开发,是一个可探索的课题。论文结合一个国外集装箱商业区、一个宁波已建成的工业化"流动建筑"实例,分析2个真实地块临时性开发的设计意向,探讨宁波闲置土地开发利用的可能性。希望通过这方面的课题研究促成一些小规模闲置土地的利用。

摘要：目的研究纤维蛋白原、凝血酶及无机盐对纤维蛋白水凝胶透明度的影响规律,获得可制备高透明度纤维蛋白水凝胶的组方条件。方法采用单因素实验设计考察不同成分的浓度变化对水凝胶透明度的影响。目力观察水凝胶外观并测定其在全可见光波段(300~800 nm)的吸光度以评价其透明度。利用扫描电子显微镜对水凝胶进行微观结构观察。结果随着纤维蛋白原与氯化钠浓度升高,制得水凝胶的外观变透明、吸光度降低、内部纤维更细、孔径更小。氯化钙浓度升高,水凝胶透明度降低。凝血酶浓度改变对水凝胶透明度无明显影响。结论在高纤维蛋白原浓度(81 mg·mL^(-1))或氯化钠质量浓度≥5 mg·mL^(-1)条件下可制得高透明度人纤维蛋白水凝胶,高透明度人纤维蛋白水凝胶具有较细的纤维与较小的孔径。

摘要：根据猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)Rep和Cap基因保守区设计2对引物,1对外引物和1对内引物;利用设计的4条引物,在Bst大片段聚合酶的作用下,对PCV2 DNA进行恒温扩增;扩增条件为63℃恒温反应1h;建立了PCV2环媒恒温扩增技术(LAMP)检测方法。对检测方法特异性评价表明,检测方法只能检测PCV2 DNA,对猪圆环病毒1型(Porcine circovirus type 1,PCV1)、猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)及猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)检测无交叉反应。灵敏度评价表明,该检测方法可以检测到样品中10个拷贝的PCV2 DNA含量。

摘要：根据GenBank中发表的西尼罗病毒(WNV)E domainⅢ基因序列设计1对引物,用PCR方法扩增domainⅢ基因片段,回收目的基因片段定向克隆入果蝇表达载体pMT/B/V5,构建重组表达载体pMT-DⅢ。测序验证正确后,用脂质体转染法与辅助质粒pCoBlast共转染果蝇S2细胞,通过Blasticidin进行加压筛选,获得了抗性细胞S2-DⅢ。提取S2-DⅢ细胞的基因组DNA,用PCR方法检测目的基因在果蝇S2细胞中的整合与表达。用硫酸铜溶液诱导表达,收集无血清的细胞表达上清,样品浓缩后进行SDS-PAGE及Western blotting鉴定。结果表明,研究成功构建了重组表达载体pMT-DⅢ,转染细胞经12mg/L的Blasticidin筛选及鉴定后获得了稳定表达WNV E do-mainⅢ蛋白的果蝇S2细胞株。

摘要：根据GenBank中发表的禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)序列设计了1对引物并分别引入NotⅠ和NcoⅠ酶切位点,用PCR方法扩增AIV HA基因片段。回收目的基因片段,并用NotⅠ/NcoⅠ限制性内切酶消化,经纯化后,将其定向克隆入果蝇表达载体pMT/B/V5中,构建重组表达载体pMT-HA。测序验证正确后,用脂质体转染法与辅助质粒pCoBlast共转染果蝇S2细胞,通过Blasticidin(杀稻瘟素)进行加压筛选,获得了抗性细胞S2-HA。提取S2-HA细胞的基因组DNA,PCR检测目的基因在果蝇S2细胞中的整合与表达。用终浓度500μmol/L的硫酸铜溶液诱导表达,收集无血清的细胞表达上清,样品浓缩后进行SDS-PAGE及Western Blotting检测。结果表明,成功构建了重组表达载体pMT-HA,转染细胞经10 mg/L的Blasticidin筛选及鉴定后获得了稳定表达HA的果蝇S2细胞株。

摘要：基于实时荧光定量PCR技术建立了一种有效地检测牛病毒性腹泻病病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)核酸的方法。对BVDV基因组进行同源比对,选取5′UTR区作为扩增目的区,经软件分析后设计特异扩增引物,扩增片段长度为203 bp。选用SYBR染料作为扩增时信号指示剂,经扩增曲线分析表明,建立的方法可有效地检测BVDV。检测体系可检测到102copies/μL的样品拷贝数。故本研究建立的BVDV实时定量检测体系可用于易感动物、牛源血液生物制品及其他可能感染或污染BVDV样品的检测。

摘要：目的 建立能同时检测人细小病毒B19（简称B19病毒）3种基因型的通用核酸检测（NAT）体系,并进行方法学评价。方法 对B19病毒3种基因型代表毒株全序列进行比对,选取其保守区域（NS1区）设计B19病毒的通用引物和探针。为避免假阴性结果,在体系中引入竞争性噬菌体内标。将适宜浓度的内标添加到一系列梯度稀释的参考品质粒中,建立B19病毒实时荧光定量PCR（q PCR）标准曲线。对建立的B19病毒通用NAT体系分别进行敏感性、特异性、重复性等方法学评价。结果 建立的B19病毒实时q PCR检测体系的标准曲线在1×109~1×10^3拷贝（copies）/μl模板浓度范围内相关性良好。方法学评价显示,体系的最低检测下限为10拷贝/μl;与其他血源传播病毒等无交叉反应;批内和批间实验重复性良好。结论 建立了B19病毒3种基因型全检的通用NAT体系,不仅可用于B19病毒感染的诊断,还可用于血液和血液制品中B19病毒的NAT筛查,对于保障输血和血液制品的病毒安全性具有重要意义。

摘要：通过序列比对和Blast分析,选定犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)VP2蛋白保守区基因为检测的目的基因,引物采用Primer Premier 5.0软件设计。利用灵敏度较高的TaqMan探针法建立CPV核酸检测方法。通过对标准品的扩增、测序及对标准扩增曲线的绘制,建立CPV核酸检测方法。同时对建立的检测方法进行了检测特异性、灵敏度和重复性分析。将阳性对照标准品进行10倍梯度稀释后可检测到102拷贝/μL样品,表明该检测体系具有较高的检测灵敏度。通过分析表明,本检测方法在用空白对照及类似的猪细小病毒、猪圆环病毒作为扩增对照时,没有发现非特异性产物的产生,表明该体系对于CPV的检测是特异的。通过6次批间重复检测,体系的变异系数小于3%,表明该检测体系具有良好的重复性。

摘要：根据国外已发表的番鸭细小病毒 (MPV) FM株基因组核苷酸序列 ,设计了 1对引物 ,分别对国内 2株番鸭细小病毒分离株 MPV扬州 (YZ)株和 MPV佛山 (FS)株主要结构蛋白 (VP2和 VP3)基因进行 PCR扩增 ,并克隆到p CR3.1T载体 ,经酶切鉴定筛选出阳性克隆质粒并进行核苷酸序列分析比较。结果表明 ,MPV YZ和 MPV FS的VP2 - VP3基因大小均为 176 4bp,编码 5 88个氨基酸。 MPV YZ、MPV FS与 MPV FM核苷酸序列同源性分别为98.5 %和 98.6 % ,氨基酸序列同源性为 97.1%和 97.8% ;MPV YZ与 MPV FS核苷酸序列的同源性为 99.5 % ,氨基酸序列同源性为 98.8%。