摘要：目的建立定量检测粪便中具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum,***)的免疫磁珠捕获联合实时荧光定量PCR(IMBs-qPCR)技术方法。方法5×***(0.4%甲醛灭活)免疫新西兰兔制备多克隆抗体,饱和硫酸铵沉淀法和HiTrap Protein G HP亲和层析法纯化抗体;优化MS300免疫磁珠偶联多克隆抗体和捕获***的反应条件。根据***特异性基因NusG设计引物和构建含目的基因的载体质粒,建立qPCR反应体系并绘制qPCR标准曲线。最后,在不同浓度(50CFU/200mg^10^5CFU/200mg)***的人粪便标本中,评价该方法的检测效能。结果成功制备***多克隆抗体,抗体ELISA效价>320000,盐析和亲和层析纯化抗体纯度分别为60%和85%;多克隆抗体偶联免疫磁珠时偶联缓冲液最佳pH值为5.0,最佳温度为25℃,最佳偶联时间为2.5h,加入抗体最适量为10μg/mg,免疫磁珠最佳捕获温度为37℃,时间为40min;成功建立qPCR反应体系;IMBs-qPCR和粪便全基因组DNA提取法直接检测模拟粪便标本最低检测限分别为100CFU/200mg和400CFU/200mg,ROC曲线中AUC分别为0.948和0.878。结论成功建立了IMBs-qPCR检测粪便中***的方法,该方法具有简便快速、灵敏度高、特异性好等特点。

摘要：随着纽约、巴黎、伦敦、米兰四大时装周的结束,2013年春夏的服装流行趋势呼之欲出。从中世纪复古风到明媚田园风,再到简约时尚风和街头摇滚风,每种风格都养眼而迷人……中世纪复古风没错,中世纪复古风格开始重新引领时尚了。有设计师把香奈儿2013早春度假秀的主题简明扼要地概括为"社会主义法国下的凡尔赛宫"。中世纪的生活方式、衣着风格成为了设计师本季的灵感缪斯。