摘要：目的:构建并鉴定小鼠信号转导子和转录激活因子4(STAT4),信号转导子和转录激活因子6(STAT6)具有发夹结构小干扰RNA(shRNA)表达质粒。方法:根据STAT4和STAT6基因mRNA序列,在体外分别合成有小发夹结构的2条STAT4特异性寡核苷酸序列,2条STAT6特异性寡核苷酸序列,退火后与线性化pGenesil-3质粒连接,转化感受态细胞DH5α,扩增,纯化得到所需质粒。同时设计构建分别针对小鼠甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)的干扰质粒作为阳性对照,不具有基因同源性的非特异性基因的质粒作为阴性对照序列。通过酶切后琼脂糖凝胶电泳和基因测鉴定纯化质粒分子量及插入片段的序列。结果:经限制性酶切和测序鉴定分析证实基因插入正确,与设计的序列完全相符。结论:成功构建了针对小鼠STAT4,STAT6基因的发夹结构小干扰RNA表达载体。为今后利用基因沉默技术从转录后水平抑制STAT4,STAT6的研究奠定基础。

摘要：背景支气管哮喘(以下简称哮喘)是儿童期最为常见的慢性气道疾病,其因病程长、反复发作,从而严重影响儿童的生长发育和生活质量。全科医师作为基层医疗健康服务的主要提供者,在儿童哮喘早期筛查和分级管理过程中发挥着重要作用,了解全科医生对该病的防治服务水平,可为基层儿童哮喘防治服务质量提升提供建议。目的调查基层全科医师对儿童哮喘的防治服务水平及其影响因素。方法2022年4—7月,从重庆市38个区(县)中随机抽取22个区(县),并对样本区(县)的基层全科医师进行问卷调查。调查问卷由课题组查阅相关指南及文献自行设计,并经过两轮专家函询和预调查形成,包括知识、态度、行为和自评4个维度。调查基层全科医师对儿童哮喘防治的认知、态度、行为及自评情况并分析其影响因素。结果共有234名基层全科医师参与问卷调查。全科医师对儿童哮喘防治的知识得分为(6.03±2.04)分,合格率为44.9%;态度得分为(49.42±4.94)分,合格率为100.0%;行为得分为(30.55±6.66)分,合格率为87.2%;自评得分为(21.57±5.30)分,合格率为85.0%。在转诊指征的选择上,有98.7%(231/234)的全科医师认为中度以上急性哮喘发作,经过紧急处理后仍无明显缓解的患儿需要转诊,有94.0%(220/234)的全科医师认为规范化治疗哮喘后仍得不到有效控制的患儿需要转诊。在遇到症状控制不佳的患儿就诊时,33.8%(79/234)的全科医师会仔细分析控制不佳的原因,17.5%(41/234)的全科医师会告诫其谨遵医嘱、暂时观察并约好下次复查时间。33.8%(79/234)的全科医师对在基层进行儿童哮喘诊疗活动持有不确定或者反对的态度,影响因素主要为医护人员缺乏疾病相关知识储备和学习机会、家长不愿来基层就诊、儿科医患关系较成人紧张、该病种患儿较少、相关设施设备缺乏。多元线性回归分析显示:职称和儿童哮喘知识培训经历是知识得分的影响因素(P<0.05);学历和基层工作年限是态度得分的影响因素(P<0.05);儿科工作经验和儿童哮喘知识培训经历是行为和自评得分的影响因素(P<0.05)。结论重庆市基层全科医师对哮喘患儿的防治有一定信心,但防治理论知识水平欠佳;态度较积极,行为积极性也尚可,但两者之间存在一定差距。提示在做好基层儿科设施设备优化配置和提高居民信任度的同时,知识与实践培训仍是提升全科医师知识储备、防治自信和自身能力方面的重要因素,应加强全科医师的学历教育和继续教育培训,有效激励全科医师学习和自我提升的能力。

摘要：目的探究糖皮质激素治疗儿童难治性肺炎支原体肺炎的类型选择、剂量、疗程、时机和用药途径。方法计算机检索PubMed、Embase、Cochrane Library、Web of Science、中国生物医学文献数据库、中国知网和万方数据库,检索糖皮质激素治疗儿童难治性肺炎支原体肺炎的文献,进行文献筛选、数据提取、偏倚风险评估、RevMan5.3统计软件进行meta分析。结果初步检索到3706篇文献,最终纳入24篇随机对照试验(RCT),包括不同剂量甲泼尼龙23篇,不同激素类型1篇。未检索出激素不同疗程、时机和用药途径对比的RCT。结果显示甲泼尼龙2 mg/kg较1 mg/kg可提高总有效率(P=0.0001),但不良反应更高(P<0.00001)。甲泼尼龙大于2 mg/kg较小于或等于2 mg/kg可提高总有效率(P<0.0001),但不良反应更高(P=0.04)。亚组分析显示,<10 mg/kg和小于或等于2 mg/kg的总有效率差异无统计学意义(P=0.05),但大于或等于10 mg/kg总有效率明显高于小于或等于2 mg/kg(P=0.04)。2个亚组的不良反应均高于小于或等于2 mg/kg,但差异无统计学意义(<10 mg/kg:P=0.32;≥10 mg/kg:P=0.14)。不同激素类型比较的RCT显示甲泼尼龙相对于地塞米松效果更佳。结论大剂量甲泼尼龙治疗儿童难治性肺炎支原体肺炎可以提高总有效率,但不良反应也更高。甲泼尼龙效果可能优于地塞米松,但仍需要更多多中心、高质量和设计良好的RCT。

摘要：目的探讨维生素D补充与儿童哮喘的相关性。方法纳入对象为基于社区、学校和医疗机构的儿童,暴露因素为维生素D补充,观察哮喘相关结局的随机病例对照研究。计算机检索PubMed、Embase、Cochrane Library数据库,检索截止日期为2018年12月30日。对纳入的文献行筛选、资料提取及方法学质量评价,采用Cochrane风险偏倚评估工具,应用Revman5.3软件进行meta分析。结果共有11项符合纳入标准的随机对照试验,最终纳入9项研究,其中干预组共361例,对照组共341例。meta分析结果显示:2组血清25(OH)D水平比较差异无统计学意义(P=0.13);以是否联合特异性免疫治疗进行亚组分析,合并效应均数差(MD)分别为9.44nmol/L和15.23nmol/L;干预组哮喘发作次数显著低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论补充维生素D可以减少哮喘发作,对血清25(OH)D水平、肺功能和哮喘症状评分的作用有限;由于有其他潜在的混杂因素,未来需要进行大规模、长时间、精心设计的随机对照试验来了解维生素D对儿童哮喘的治疗作用。

摘要：构建小鼠Smad6基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,有效沉默骨髓树突状细胞(BMDC)的Smad6基因表达,为构建骨髓致耐受DC用于哮喘等自身免疫疾病的研究。设计小鼠Smad6 shRNA序列,合成、退火,得到双链DNA,与经酶切后的Psih1-H1-copGFP shRNA Vector载体连接产生LV-shSmad6慢病毒载体,并测序鉴定。转染293TN细胞,包装产生慢病毒,测定滴度。感染小鼠骨髓树突细胞,检测Smad6基因的表达状况成功构建Smad6 shRNA的慢病毒载体LV-shSmad6。包装慢病毒,并显著抑制Smad6 mRNA水平及蛋白水平的表达。成功构建出小鼠Smad6基因shR-NA慢病毒载体,为后期研究Smad6基因在哮喘发病机制及新治疗方法提供了稳定的转染细胞载体。