摘要：目的观察3种不同中医治法对大鼠肝癌半乳糖凝集素(GAL-3)表达的调控差异以及GAL-3在人肝癌细胞增殖中的作用,以探讨肝癌治疗的新靶点。方法将72只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、喃氟啶组(喃氟啶8.33mg/100g)、清热解毒组(清热解毒方1.5g/100g)、活血化瘀组(活血化瘀方1.27g/100g)、健脾理气组(健脾理气方1.75g/100g),每组12只,除正常组外,其余各组大鼠采用二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌,各组均给药6周,检测各组大鼠肝癌组织(正常组取肝组织)GAL-3的表达。根据人GAL-3基因编码区设计2个siRNA靶点,并构建重组质粒转染SMMC-7721人肝癌细胞株,分为空白组、阴性组、GAL-3RNAi组,实时定量PCR检测各组GAL-3mRNA的表达,MTT法检测各组转染后24h、72h、144h细胞增殖。结果模型组GAL-3基因表达显著增加,健脾理气组能下调其表达;转染72h后GAL-3RNAi组GAL-3mRNA表达量明显降低;转染144h后,GAL-3RNAi组肝癌细胞的生长增殖得到了明显的抑制(P<0.01)。结论 GAL-3基因在肝癌组织中高表达,健脾理气方能显著下调该基因表达。

摘要：目的:观察不同中医治法对大鼠肝癌波形蛋白(vimentin,VIM)表达的调控差异,以及VIM在人肝癌细胞增殖中的作用。方法:将84只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组以及实验组,除正常组外均采用二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌,实验组分别经中药健脾益气、清热解毒、活血化瘀等治疗,检测各组大鼠肝癌组织(正常组取肝组织)VIM表达的差异;根据人VIM基因编码区设计2个siRNA靶点,并将构建好的重组质粒转染SMMC-7721人肝癌细胞株,Realtime-PCR检测转染前后该基因的表达差异,MTT法检测转染前后细胞生长增殖情况。结果:芯片结果显示,VIM基因在大鼠肝癌形成后表达显著增加(模型组芯片读数为正常组10倍以上),健脾和活血治法明显下调其表达;采用MTT法筛选到一个VIM基因RNA干扰有效靶序列,脂质体转染144 h后细胞的生长增殖得到了明显的抑制;实时荧光定量PCR检测表明,转染72 h后该基因的表达量明显降低(转染效率为50%)。结论:肝癌细胞恶性增殖有赖于VIM基因的高表达,健脾和活血方药能显著下调该基因表达。

摘要：目的观察不同中医治法对大鼠肝癌TrxR1表达的调控差异,以及TrxR1在人肝癌细胞增殖中的作用。方法将84只雄性Wistar大鼠随机分为正常组和模型组以及实验组,除正常组外均采用DEN诱发大鼠肝癌,实验组分别经中药健脾益气、清热解毒、活血化瘀等治疗,检测各组大鼠肝癌组织(正常组取肝组织)TrxR1表达的差异;设计2个人TrxR1基因siRNA靶点,将重组质粒通过脂质体转染入SMMC-7721人肝癌细胞株,MTT法检测转染前后细胞生长增殖情况、Real-time-PCR检测该基因的表达差异。结果芯片结果显示,TrxR1基因在大鼠肝癌形成后表达显著增加,益气健脾治法明显下调其表达;采用MTT法筛选到一个TrxR1基因RNA干扰有效靶序列,脂质体转染144 h后细胞的生长增殖得到了明显的抑制;实时荧光定量PCR检测表明,转染72h后该基因的表达量明显降低。结论肝癌细胞恶性增殖有赖于TrxR1基因的高表达,益气健脾方药能显著下调该基因表达。

摘要：目的:探讨MT1E基因在肝癌形成过程中不同阶段的表达及其在肝癌细胞中的生物学功能.方法:DEN诱发大鼠肝癌形成模型,分别观察造模4、8、16、20wk后肝脏组织病理形态学的改变以及MT1E基因表达的差异;针对MT1E基因mRNA序列设计2个siRNA靶点,分别经质粒重组后电转入SMMC-7721肝癌细胞株中,实时荧光定量PCR检测MT1E基因的表达,MTT法检测细胞生长增殖.结果:大鼠肝癌造模4、8wk时肝组织主要表现为炎性病变,而到16wk后呈现典型的增生病变,20wk后已全部发展为肝细胞癌.MT1E基因在造模16wk后表达明显增加,与对照组比较差异显著(芯片读数:11524vs5462).成功筛选到MT1E基因RNA干扰的一个有效靶序列,电转染72h后该基因的表达量较空白对照组与阴性对照组明显降低(0.38vs1.00,0.93,P<0.01).与阴性对照组比较,有效干扰靶点电转染144h后细胞的生长增殖得到了明显抑制(0.1700±0.0313vs0.5748±0.0480,P<0.01).结论:成功应用DEN诱发大鼠肝癌形成MT1E基因在肝癌形成的后期表达明显升高其高表达与肿瘤细胞的恶性增殖有关.

摘要：目的:观察不同中医治法对大鼠肝癌CK18表达的调控差异,以及CK18在人肝癌细胞增殖中的作用。方法:(1)采用DEN诱发大鼠肝癌,分别经中药健脾益气、清热解毒、活血化瘀等治疗后,检测肝癌组织CK18表达的差异;(2)设计2个人CK18基因siRNA靶点,将重组质粒电转入SMMC-7721人肝癌细胞株,MTT法检测细胞生长增殖情况、Realtime-PCR检测该基因的表达差异。结果:(1)芯片结果显示,CK18基因在大鼠肝癌形成后表达显著增加,不同中医治法对其具有不同程度的轻度调控作用,其中健脾益气治法下调作用较明显;(2)采用MTT法筛选到一个CK18基因RNA干扰有效靶序列,转染144h后细胞的生长增殖得到了明显的抑制;(3)实时荧光定量PCR检测表明,转染72h后该基因的表达已明显降低。结论:肝癌细胞恶性增殖有赖于CK18基因的高表达,目前常用治法对该基因的调控作用有限,因而该基因可望作为肝癌疗效筛选评价指标。

摘要：目的:比较常用不同中医治法对MT1E表达调控作用的差异,以及初步探讨MT1E在肝癌细胞中的生物学功能。方法:(1)以DEN诱发大鼠肝癌形成为模型,应用基因芯片检测健脾益气、清热解毒、活血化瘀等常用中医治法对MT1E基因表达的差异;(2)针对MT1E基因mRNA序列设计2个siRNA靶点,分别经质粒重组后电转入SMMC-7721肝癌细胞株中,用实时荧光定量PCR技术检测MT1E基因的表达情况,用MTT法检测细胞生长增殖情况。结果:(1)芯片结果显示,MT1E基因在肝癌形成后表达明显增加,不同中医治法对其具有不同程度的调控作用,其中健脾益气法的下调作用最明显;(2)成功筛选到MT1E基因RNA干扰的1个有效靶序列,经实时荧光定量PCR技术检测到电转染72h后,该基因的表达水平明显降低;(3)MTT的结果显示,有效干扰靶点电转染144h后细胞的生长增殖得到了明显的抑制。讨论:MT1E基因是中医健脾益气法防治原发性肝癌的有效靶点之一,经生物学功能研究表明,该基因的高表达与肿瘤细胞的恶性增殖有关。

摘要：目的:观察不同中医治法对大鼠肝癌干扰素相关发育调节因子1(IFRD1)表达的调控差异,以及IFRD1在人肝癌细胞增殖中的作用。方法:(1)采用二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌,分别经中药健脾益气、清热解毒、活血化瘀等治疗后,Affymetrix rat 230A GeneChip arrays检测肝癌组织IFRD1表达的差异;(2)设计3个人IFRD1基因siRNA靶点,将重组质粒电转入SMMC-7721人肝癌细胞株,MTT法检测细胞生长增殖情况、Realtime-PCR检测该基因的表达差异。结果:(1)芯片结果显示,IFRD1基因在大鼠肝癌形成后表达显著增加,不同中医治法对其具有不同程度的下调作用,其中活血化瘀治法下调作用较明显,对照西药化疗反而具有上调作用;(2)采用MTT法筛选到1个IFRD1基因RNA干扰有效靶序列,转染144h后细胞的生长增殖得到了明显的抑制(与阴性对照组相比,P<0.01);(3)实时荧光定量PCR检测表明,转染72h后该基因的表达明显降低。结论:SMMC-7721肝癌细胞恶性增殖有赖于IFRD1基因的高表达,而中药活血化瘀治法对其具有下调作用。

摘要：目的:观察不同中医治法对大鼠肝癌UBE2D2表达的调控差异,以及UBE2D2在人肝癌细胞增殖中的作用。方法:采用DEN诱发大鼠肝癌,分别经中药健脾益气、清热解毒、活血化瘀等治疗后,Affy-metrix rat 230A GeneChip arrays检测肝癌组织UBE2D2表达的差异;设计2个人UBE2D2基因siRNA靶点,将重组质粒经脂质体转入SMMC-7721人肝癌细胞株,MTT法检测细胞生长增殖情况、Realtime-PCR检测该基因的表达差异。结果:芯片结果显示,UBE2D2基因在大鼠肝癌形成后表达显著增加,不同中医治法对其具有不同程度的下调作用,其中健脾理气法下调作用较明显;采用MTT法筛选到1个UBE2D2基因RNA干扰有效靶序列,转染6 d后细胞的生长增殖得到了明显的抑制(与阴性对照组相比,P<0.01);实时荧光定量PCR检测表明,转染6 d后该基因的表达明显降低。结论:UBE2D2基因的高表达与肝癌细胞恶性增殖有关,而中药健脾理气治法对其具有下调作用。

摘要：目的观察不同中医治法对大鼠肝癌角蛋白18(CK18)表达的调控差异,及其在人肝癌细胞增殖中的作用。方法 (1)采用DEN诱发大鼠肝癌模型,分别经中药健脾益气、清热解毒、活血化瘀等治法治疗后,检测肝癌组织(和正常肝组织)CK18表达的差异;(2)设计2个人CK18基因siRNA靶点,将重组质粒电转入SMMC-7721人肝癌细胞株,MTT法检测细胞生长增殖情况、Realtime-PCR检测该基因的表达差异。结果 (1)芯片结果显示,CK18基因在大鼠肝癌形成后表达显著增加,不同中医治法对其具有不同程度的轻度调控作用,其中健脾益气治法下调作用较明显;(2)采用MTT法筛选到一个CK18基因RNA干扰有效靶序列,转染144h后细胞的生长增殖得到了明显的抑制;(3)实时荧光定量PCR检测表明,转染72h后该基因的表达已明显降低。结论肝癌细胞恶性增殖有赖于CK18基因的高表达,目前常用治法对该基因的调控作用有限,因而该基因可望作为肝癌疗效筛选评价指标。

摘要：目的:探索在《中医学综合实验》课程中开展PBL教学。方法:依据课程教学目的,确立PBL具体教学目标,选择我国常见病临床经验总结到动物实验相互衔接的3个案例,分4个单元小班PBL教学;在课程结束之际开展评价及学生无记名填写调查问卷。结果:连续3年开展了PBL教学,共计有232名学生参加,每年平行开设的4个PBL班均顺利完成教学任务。调查表明,学生对PBL教学的形式和内容给予了充分的肯定,赞同本课程PBL形式和内容者占90%、认为有助于培养知识交叉渗透和融会贯通者占95%、认为有助于激发好奇心和调动其主观能动性者占93%、认为有助于培养创造能力者占84%,达到了教学目的。结论:本课程PBL教学设计与实施是可行的,对于提高实验中医学课程体系的教学质量,加强中医药人才科研素质与能力等的培养是有益的。