摘要：目的 :为设计研制安全有效的人脑型疟疫苗提供进一步科学依据。方法 :应用多聚酶链反应 ( PCR)技术对中国 5例脑型疟患者恶性疟原虫云南省勐腊县勐罕 CMH/YN分离株和云南省盈江县农场 CYJ/YN分离株基因组 DNA裂殖子表面蛋白 1( MSP1)第 13— 17区基因进行扩增 ,将扩增产物分别经 Eco RI和 Kpn I双酶切后 ,回收的 MSP1第 16— 17区基因分子定向克隆M13mp18和 M13mp19载体 ,按 Sanger双脱氧链终止法进行 DNA序列测定 ,并与 MAD2 0、K1和Wellcome株原型基因进行同源性分析比较。结果 :发现脑型疟患者恶性疟原虫 CMH/YN和 CYJ/YN分离株 MSP1第 16— 17区基因之间的序列完全相同 ,全长为 918bp,编码 30 6个氨基酸 ,含 12个半胱氨酸组成的 2个表皮生长因子 ( EGF)单体结构域 ;除了在核苷酸第 4 869位缺失 1个碱基和散在分布 5个碱基点突变之外 ,与 MAD2 0、K1和 Wellcome株相应基因之间的核苷酸同源性分别为 98.6%、2 3.3%和 2 2 .8%。结论 :本研究在世界上首次报道脑型疟患者恶性疟原虫分离株MSP1第 16— 17区 DNA序列测定分析结果 ,确证该基因与 MAD2 0株高度同源性 ,并发现在1691— 170 1位氨基酸存在 TCTEEDSGSSR表位。

摘要：目的 :为设计研制安全有效的人脑型疟疫苗提供理论依据。方法 :根据 MAD2 0株裂殖子表面蛋白 1( MSP1)和 FC2 7株裂殖子表面蛋白 2 ( MSP2 )基因编码区高度保守碱基设计并合成两对引物 ,应用多聚酶链反应 ( PCR)技术对 5例脑型疟患者恶性疟原虫云南省勐腊县勐罕分离株 CMH/ YN和云南省盈江县农场 CYJ/ YN分离株基因组 DNA MSP1第 13- 17区基因和MSP2基因进行扩增 ,并将扩增产物分别经 Eco RI和 Kpn I,Bam HI和 Hind III双酶切后 ,分子定向克隆 M13mp18和 M13mp19载体 ,转染大肠杆菌 ( ***) TG1,从含 X- gal和 IPTG的 LB平板上 ,将随机筛选得到的单个无色噬菌斑经 *** JM10 3扩增 ,用碱裂解法抽提重组子复制型DNA ( RFDNA)后 ,再分别经 Eco RI和 Kpn I,Bam HI和 Hind III双酶切鉴定。结果 :证实重组子为编码脑型疟患者恶性疟原虫 CMH/ YN和 CYJ/ YN分离株 MSP1第 16- 17区基因和 MSP2基因分子克隆 M13载体。结论 :首次报道确证脑型疟患者恶性疟原虫 CMH/ YN和 CYJ/ YN分离株MSP1第 16- 17区基因和 MSP2基因分别与 MAD2 0株 MSP1和 FC2 7株 MSP2相应基因完全一致。这些发现对研究预防人脑型疟疫苗和建立一种新型脑型疟恶性疟原虫检测方法具有重要意义。

摘要：目的：寻找恶性疟原虫裂殖子表面主要蛋白Ｐ１９５中的红细胞结合位点，为设计疫苗阻断裂殖子入侵人红细胞提供实验依据。方法：在大肠杆菌中分８段表达Ｐ１９５蛋白，用镍亲和层析柱分离这些蛋白。各段蛋白经复性后用胶体金标记。标记后的蛋白与人红细胞共孵育，经固定、切片后在电镜下观察。同时将各段蛋白加入到体外培养的人恶性疟原虫的培养基上清中，观察各段蛋白对裂殖子入侵红细胞的影响。结果：Ｐ１９５蛋白中的一段，即Ｍ６（氨基酸序列３８４～５９５）具有红细胞结合作用。Ｍ６的胶体金复合物不能与经胰酶和神经氨酸酶处理过的红细胞发生结合。Ｍ６还能抑制裂殖子入侵红细胞。结论：Ｐ１９５的一段区域（Ｍ６）具有唾液酸残基依赖性红细胞结合作用，它可能是恶性疟原虫裂殖子识别人红细胞的“标志”。

摘要：目的寻找恶性疟原虫裂殖子表面主要蛋白Ｐ１９５中的红细胞结合位点，为设计疫苗阻断裂殖子入侵红细胞提供实验依据。方法在大肠杆菌中分８段表达Ｐ１９５蛋白。各段蛋白用镍亲和层析柱分离，然后复性。将得到的各段蛋白免疫家兔，制备抗血清。在体外培养疟原虫至成熟裂殖体期，将各段蛋白及其相应的抗血清分别加入到培养基上清中，继续培养２４小时，检查红细胞感染率。通过感染率了解各段蛋白及其抗体对裂殖子入侵红细胞的影响。结果Ｐ１９５蛋白中氨基酸序列为３８３～５９５（Ｍ６），５９５～８９７（Ｍ７），１３９７～１６６３（Ｍ１１）的三段蛋白的抗血清具有抑制裂殖子入侵红细胞的作用，而其中Ｍ６蛋白片段也具有抑制裂殖子入侵红细胞的作用。结论Ｐ１９５蛋白中氨基酸序列为３８３～５９５的一段序列，Ｍ６可能含恶性疟原虫识别人红细胞的位点，该位点可以作为疟疾疫苗的候选抗原。

摘要：目的 :建立 PCR检测恶性疟原虫的新方法。方法 :作者采用自行设计并合成的一对恶性疟原虫特异引物 ,经 PCR扩增环子孢子蛋白 ( CSP)基因 3 端保守区序列 2 4 5bp片段 ,观察了它的特异性、敏感性和稳定性。结果 :1从 4株培养的恶性疟原虫和 2例恶性疟患者血样中均扩增出约 2 4 5bp的 DNA目的片段 ,用业已鉴定的 CSP基因序列作模板再行扩增证实其为恶性疟原虫CSP基因片段 ;2对间日疟原虫、利什曼原虫、弓形虫和健康人血样进行 PCR反应 ,均未见扩增条带 ;3本检测系统可检出恶性疟原虫感染血样中 0 .18个原虫所含的 DNA模板 ;4采用不同方法制备模板及不同反应方式均能获得满意结果 ;结论 :PCR扩增恶性疟原虫 CSP基因 3 端片段用于恶性疟原虫检测具有灵敏、高度特异且稳定性好等优点。