摘要：目的　建立一种简便、敏感、精确的微反应板酶联杂交技术 ,以鉴定HBV基因的竞争PCR扩增产物。方法　设计了两种捕获探针 ,能分别与竞争PCR扩增产物中的野生片段和突变片段杂交。捕获探针通过 3′ 端修饰的氨基与微量DNA结合板孔表面的NOS基团化学结合而被“竖直”地包被在反应板上 ;将热变性后的产物加入两种捕获探针反应孔内 ,产物中带有生物素的野生或突变片段的一条单链与相应的捕获探针杂交 ;最后用链亲和素 碱性磷酸酶及底物检测杂交信号。结果　该方法检测PCR产物DNA的灵敏度为 80ng/ml,大于琼脂糖凝胶电泳染色鉴定法。获得野生片段和突变片段杂交信号值后 ,可根据公式计算扩增前野生模板的初始量。结论　本方法操作简单、灵敏度高、结果数据化、特异性强 ,适用于竞争PCR产物分析。

摘要：我是乙肝“大三阳”患者，患病已有五六年，药是吃了不少，就是不见好转。不久前我在报纸上看到一篇文章，介绍说“最近在北京召开的全国肝病学术研讨会上传出一个令肝病患者特别振奋人心的消息……肝病新药‘兰×’获得成功……

摘要：目的 :研究血液透析患者中 TT病毒 (TTV)的感染状况及其致病性。 方法 :针对病毒基因保守区设计引物 ,采用套式 PCR方法对 6 9例血液透析患者血清标本进行 TTV DNA检测及序列分析 ,并同时检测患者血清丙氨酸转氨酶 (AL T)及丙型肝炎病毒抗体 (抗 - HCV)。结果 :患者血清 TTV DNA总阳性率为 2 7.5 %。对其中 1例 PCR扩增产物测序 ,结果与其他TVV分离株如 GH1、TA2 78、TTVCHN1和 TTVCHN2的核苷酸序列同源性为 89%～ 10 0 % ,推测的氨基酸序列同源性为87%～ 10 0 %。抗 - HCV阳性与阴性患者的 TTV DNA阳性率无明显差异。所有患者均未见 AL T明显升高。结论 :血液透析患者存在较严重的 TTV感染 ,TTV感染与 HCV感染无明显相关性 ,未发现 TTV感染导致 AL T明显升高的证据。

摘要：目的　建立一种敏感、特异和精确的乙型肝炎病毒基因PCR及其产物酶联杂交定量分析技术。方法　制备了一种与野生扩增片段等长的PCR内参照 ;设计了一对HBV基因组S区基因扩增引物 ,上游引物的 5′ 端用生物素修饰 ,可同时扩增长为 319bp的野生和内参照片段。两套捕获探针可分别与竞争PCR产物中的野生片段和突变片段杂交。在同一反应管内 ,加入已知量内参照及待测HBVDNA标本 ,进行PCR扩增 ,然后用酶联杂交法进行产物分析。根据Clementi等介绍的公式计算待测标本中的HBVDNA含量。结果　灵敏度达到 10 -3fmol/L。在该法中 ,由于有PCR过程中的特异引物及酶联杂交过程的特异探针两个环节的限制 ,因此具有很高的特异性。结论　竞争PCR及其产物酶联杂交定量法是一种相对精确、灵敏度很高和特异性较强的HBV基因全定量测定技术 ,优于外参照法及其它产物定量法。

摘要：目的:通过使用3’末端碱基游移混合引物,减少引物末端错配,提高多变区基因片段的PCR检测阳性率。方法:在HBV DNA P基因区设计一对检测阳性率相对较高的引物(原型引物),在原型引物序列基础上将两根引物的3’末端分别截去1个或2个碱基,设计出两对参数与原型引物近似的突变引物。分别单独用原型引物和原型引物与突变引物组成的混合引物,在相同条件下对27份HBV DNA阳性标本行PCR,比较二者阳性率。用混合引物扩增4例拉米呋丁治疗无效患者血清HBV DNA,将扩增产物测序并评价3’末端错配对PCR的影响。结果:原型引物和混合引物检测阳性率分别为70.4％(19/27)和85.2％(23/27),两者差异非常显著(P<0.05)。引物3’末端错配能导致PCR假阴性。结论:扩增保守性相对较差的基因片段,采用3’末端单个或多个碱基截短的引物,构成3’末端碱基游移混合引物,可以避免因3’末端错配产生的PCR假阴性,提高检测阳性率。

摘要：目的：了解血透患者庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染率及与其他肝炎病毒重叠感染的情况。方法：收集５７份血透患者血清标本，根据ＨＧＶＲＮＡ保守片段５′非编码区序列，设计了两对引物，采用逆转录巢式ＰＣＲ扩增ＨＧＶＲＮＡ，以及ＥＩＡ法检测ＨＧＶＩｇＧ抗体。同时还检测了ＨＢＶＤＮＡ及ＨＣＶＩｇＧ抗体。结果：５７份标本中，４份ＨＧＶＲＮＡ阳性（７．０％），２份ＨＧＶＩｇＧ抗体阳性（３．５％）。ＨＧＶＲＮＡ与ＨＧＶＩｇＧ抗体呈“分离”现象。４份ＨＧＶＲＮＡ阳性标本中２份为ＨＢＶＤＮＡ阳性，２份为ＨＣＶＩｇＧ抗体阳性；其中１份标本ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＩｇＧ抗体均为阳性。结论：血透患者ＨＧＶ感染率高于健康献血员和正常人群，ＨＧＶ可与ＨＢＶ和ＨＣＶ重叠感染。

摘要：1设想医院可以建立一种内部的风险共担机制,即设计一种医院内部的医疗风险金.筹集的资金包括医务人员自筹,新技术、新疗法积分和医疗成本提留3个部分.