摘要：背景:糖尿病视网膜病变是糖尿病普通的并发症,牛磺酸是视网膜中含量最丰富的游离氨基酸,它是视网膜再生和发育必需的营养因子,缺乏牛磺酸会引起视网膜结构和功能改变。目的:探讨牛磺酸对糖尿病大鼠视网膜神经胶质原纤维酸性蛋白mR-NA及其蛋白表达的影响。设计:随机对照观察。单位:中国人民解放军第三军医大学。材料:试验于2003-3/2003-12在第三军医大学完成。选取封闭群SD大鼠54只,体质量为250g。将造模成功的糖尿病大鼠54只随机分为糖尿病1月组、牛磺酸干预糖尿病1月组、糖尿病2月组、牛磺酸干预糖尿病2月组、糖尿病3月组和牛磺酸干预糖尿病3月组6组,每组9只。同期选取正常对照组共15只。方法:动物单笼喂养,自由进食饮水,实验前禁食12h,用链脲佐菌素诱导糖尿病,用尿糖试纸测尿糖达(+++)以上,尾靜脉采血测血糖浓度大于16.7mmol/L即为模型建立成功。采用免疫组化、RT-PCR和Westernblotting等技术方法,检测神经胶质原纤维酸性蛋白mRNA和蛋白的表达。观察牛磺酸对糖尿病视网膜病变大鼠神经元及神经胶质细胞的影响。主要观察指标:观察神经胶质原纤维酸性蛋白mRNA和蛋白表达。结果:①免疫组化分析显示:糖尿病大鼠1个月时,牛磺酸即可抑制神经胶质原纤维酸性蛋白的免疫反应性,随着牛磺酸干预时间的延长,神经胶质原纤维酸性蛋白免疫反应性渐弱。②RT-PCR检测:2个月始,糖尿病组神经胶质原纤维酸性蛋白mRNA的表达开始增大,牛磺酸明显下调神经胶质原纤维酸性蛋白mRNA的表达。③3个月的糖尿病组神经胶质原纤维酸性蛋白蛋白表达最强。牛磺酸干预糖尿病大鼠2个月时,神经胶质原纤维酸性蛋白表达减少。结论:牛磺酸可下调神经胶质原纤维酸性蛋白及mRNA表达,对糖尿病视网膜病变具有保护作用。

摘要：目的探索学习记忆异常基因hab—1（cn308）的功能。方法1．在hab-1领域有Y63D3A．6、Y63D3A．7和Y63D3A．8等三个YAC克隆。在基因库里检索Y63D3A．6、Y63D3A．7和Y63D3A．8的cDNA序列，用DNASIS—Mac v3．6软件处理并设计引物，进行PCR。把PCR产物插入pMD^TM18-TVector载体，并培养提取Y63D3A．6、Y63D3A．7和Y63D3A．8的目的DNA，纯化DNA。2．进行rescue实验：把三种YAC克隆（clone）Y63D3A．6、Y63D3A．7和Y63D3A．8的DNA分别与GFP蛋白连接配制融合蛋白。应用OLYMPUS Axiovert S100共聚焦倒置显微镜操作系统，在心大小的***生殖腺（gonad）内分别把三种GFP融合蛋白溶液显微注射，发育传代至F1。在F1代选择带有GFP荧光的***，观察基因的表达部位，并进行Tap测试，通过观察在哪个YAC克隆把hab—1（cn308）的表现型恢复为野生型来确定hab-1的等位基因。***测序和同源性检索：hah-1的等位基因确定以后对cn308进行DNA测序。根据cn308的测序结果与已知的等位基因DNA序列进行Homology search，分析cn308的基因结构，并进行BLSTP homologic search，和其他物种比较目的基因的功能来阐明hab—1的基因功能。结果对Y63D3A．6、Y63D3A．7和Y63D3A．8等三种基因表达率进行χ^2检验结果表示差异有显著性（χ^2=26．84，P〈0．05）。表明Y63D3A．6、Y63D3A．7、Y63D3A．8等三种基因虽然连锁于第一常染色体上邻近的位置，但在***的头部表达率无关联性，并有显著性差异.同时可见Y63D3A．7强表达于***的头部，Tap测试证明Y63D3A．7把hab-1的表现型恢复野生型。DNA测序结果表明hab-1（cn308）是GAG错义突变为GGG，即Glu→Gly的突变体。BLSTP homologic search结果表明Y63D3A．7是调节线粒体complexⅠ的活性，就是说明hab-1基因与线粒体complexⅠ的功能有关。结论Y63D3A．7是hab-1的等位基因，主要表达于中枢神经系统。***的学习记忆机能低下与hab-1的突变影响线粒体complexⅠ的功能有关.