摘要：目的筛选能有效抑制神经元NgR表达的siRNA序列。方法根据siRNA靶序列设计原则,设计并化学合成针对大鼠NgR基因编码区的siRNA三对,并以一对无关序列的寡核苷酸作为阴性对照。原代培养的大鼠皮层神经元分为5组:siRNA-1组、siRNA-2组、siRNA-3组、无关序列组、非转染组,用阳离子脂质体TransMessenger Transfection Reagent转染。转染后48h行RT-PCR和免疫细胞化学检测NgR表达水平的变化。结果转染48h后,与序列2、3和无关序列转染以及未转染的细胞相比,序列1转染的神经元NgR mRNA水平明显下降,并且其NgR抗体免疫荧光染色的荧光强度也明显减弱。结论化学合成siRNA能有效地抑制原代皮层神经元NgR的表达。

摘要：　　反义核酸(Antisense nucleic acids)技术是分子遗传学和肿瘤基因治疗上颇受重视的课题.遗传学者以反向遗传学角度,利用反义核酸特异性阻断细胞内单一基因表达,研究特定基因的功能,不影响其它基因的正常功能.因而,此技术对阐明单个基因在肿瘤发生、发展中的作用有重要意义;反义核酸技术也是基因治疗中较具吸引力的手段之一.利用此项技术 ,针对与肿瘤发生、发展起重要作用的几种癌基因或抑癌基因的突变体以及自分泌生长因子及其受体的基因,设计反义核酸,在转录或翻译水平封闭异常基因,使其编码产物不表达或低表达,阻断肿瘤细胞内异常信号传导,使肿瘤细胞转入正常轨道或抑制肿瘤细胞生长或诱导肿瘤细胞凋亡.　　……

摘要：目的根据胰岛素样生长因子-受体(IGF-IR)基因序列设计了IGF-IRmRNA起始密码子下游的硫代磷酸型反义寡核苷酸和正义寡核苷酸,研究其对C6胶质瘤细胞的增殖作用。方法实验分为反义核酸组、正义核酸组和空白对照组,经细胞计数、MTT法研究反义核苷酸对胶质瘤细胞生长和增殖的抑制作用,并应用免疫细胞化学方法检测胶质瘤细胞IGF-IR和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达。结果反义寡核苷酸能有效地降低IGF-IR基因的表达,抑制体外培养的胶质瘤细胞的增殖,其抑制作用24h显效,96h仍有作用,反义寡核苷酸的抑制效果与其作用浓度有关。而正义寡核苷酸对其无抑制作用。同时可见反义寡核苷酸抑制增殖作用中,能明显下调PCNA蛋白的表达。结论IGF-IR介导的IGF-I～IGF-IR的自(旁)分泌环对胶质瘤生长极其重要,通过IGF-IR反义寡核苷酸治疗能较有效地抑制胶质瘤细胞的增殖。

摘要：目的 探讨反义基因片段对胶质瘤细胞胰岛素样生长因子-I受体（IGF-IR）基因表达抑制作用的可行性。方法 应用RT-PCR技术和免疫细胞化学方法,并经图象分析以检测反义寡核苷酸作用后细胞IGF-IR基因的表达水平的变化。结果 反义寡核苷酸能有效地降低IGF-IR mRNA表达,并随着反义核苷酸浓度的增加,其mRNA水平逐渐减少。正义核酸组与空白对照组相比较,IGF-IR mRNA水平无显著性差异。免疫细胞化学方法和生物图象分析研究发现:反义核酸组细胞IGF-IR蛋白低表达或不表达,而空白对照组和正义核酸组细胞均呈高表达。结论 针对IGF-IR基因mRNA序列起始密码子及下游序列所设计的反义寡核苷酸能有效阻止mRNA的翻译功能,使其蛋白产物表达下调,达到封闭或减弱该基因表达的目的。

摘要：目的为了使颏下血管蒂岛状皮瓣广泛地应用于修复面部组织缺损。方法在３４侧成人头颈标本上，对颏下区的血液供应和神经分布进行观察。结果颏下动脉起自面动脉，距其起点５．４ｃｍ±０．３ｃｍ处发出。起始端外径２．０ｃｍ±０．３ｍｍ。颏下动脉有２条静脉相伴行，注入面静脉。以面－颏下血管为蒂，可设计成颏下皮瓣、肌皮瓣和骨皮瓣。皮瓣的感觉神经为颈皮神经。结论皮瓣血管蒂长６．５ｃｍ±０．５ｃｍ，毗邻口腔颌面部，便于旋转，可修复面部下２／３及口腔内的组织缺损，且具有色泽与外形较好等优点。

摘要：目的　利用流式细胞仪 (flowcytometry ,FCM)探讨反义IGF IR基因片段诱导胶质瘤细胞凋亡的作用。方法　根据IGF IRcDNA序列设计其正义、反义基因片段 ,并对部分碱基进行硫代磷酸修饰。实验分为空白对照组、正义核酸组和反义核酸组 ,应用流式细胞技术检测DNA含量 ,根据DNA直方图分析凋亡细胞情况。应用透射电镜观察了凋亡细胞的形态学变化。结果　经反义寡核苷酸 5、10、15、2 0μmol·L-1处理的胶质瘤细胞其凋亡率分别为 16 0 6 %±3 86 %、2 4 5 2 %± 4 84%、36 6 9%± 5 5 3%和 43 85 %±5 72 % ,而用正义寡核苷酸 5、10、15、2 0 μmol·L-1处理的胶质瘤细胞其凋亡率分别为 3 76 %± 1 2 2 %、3 14%±1 15 %、2 5 1%± 0 93%和 3 2 6 %± 1 15 % ,空白对照组(野生型 )自然凋亡率为 1 0 1%± 0 89%。反义核酸组与对照组相比有显著性差异 (P 0 0 5 )。凋亡细胞形态上表现为细胞体积缩小 ,染色质凝聚 ,并聚集于核膜下成新月状或块状 ,胞膜内馅形成膜包裹的核碎片或细胞器 ,最后出泡形成凋亡小体。结论　反义IGF IR基因片段诱导胶质瘤细胞凋亡是其抑制细胞增殖机制之一。

摘要：目的设计原代培养SD大鼠星形胶质细胞。方法 取新生第2～3d SD红皮鼠,无菌操作下取大脑皮质,剪碎、胰酶消化结合机械吹打使细胞分散,网筛过滤,差速粘附处理去除成纤维细胞,将未粘附的细胞悬液接种培养9～12d,置摇床,舍弃含脱落细胞的细胞悬液,以去除少突胶质细胞和小胶质细胞。细胞传代,GFAP免疫组化染色鉴定。结果 成功分离培养了原代神经胶质细胞,并进行了星形胶质细胞的纯化,GFAP鉴定星形胶质细胞比例为95％以上。结论 建立星形胶质细胞体外培养方法,总结操作关键,以此为实验材料对于比较学研究是非常有帮助的。

摘要：一、材料与方法 1.寡核苷酸的设计、合成：根据IGF-IRcDNA例，设计的正义寡核苷酸为5'-A*A*GTCTGGCTCCG-GAG*G*A-3'，反义寡核苷酸为5'-T*C*CTCCGGAGCCAGAC*T*T-3'（*为硫代磷酸修饰的碱基），由中科院上海细胞所合成和纯化。

摘要：目的建立N-乙酰天冬氨酰谷氨酸(NAAG)肽酶基因剔除小鼠模型,为在体研究NAAG肽酶基因的生物学功能并揭示其在脑损伤后继发性脑损害进程中的所起的作用创造条件。方法根据小鼠NAAG肽酶基因组的序列,设计基因剔除策略,构建基因剔除载体NAAG-KO-pBR322,以电穿孔方法将基因剔除载体导入胚胎干细胞(ES),应用G418和更昔洛韦进行正负筛选,获得双抗性克隆,聚合酶链式反应(PCR)鉴定并测序获得正确同源重组的ES细胞克隆。结果同源重组的ES细胞注入小鼠囊胚后获得11只嵌合率>50%嵌合体雄性小鼠,嵌合体小鼠与C57 BL/6J雌鼠交配后获得11只杂合子小鼠,其中雄性7只,雌性4只。在雌、雄杂合子小鼠交配的后代中获得7只纯合子小鼠,PCR鉴定其基因型,逆转录PCR(RT-PCR)提示该基因鼠未表达NAAG肽酶。结论我们成功建立了NAAG肽酶基因剔除小鼠模型,其中纯合子小鼠未出现胚胎致死现象;初步的表型观察未发现NAAG肽酶基因剔除小鼠出现异常改变。

摘要：本文首先设计了能用精确数量表示力的大小和可以模拟不同作用方式的胸部挤压仪,并利用它成功地建立胸部挤压综合征动物模型,着重对其造成的脑损伤进行研究。