摘要：目的建立一种龟甲配方颗粒高分辨熔解曲线(HRM)技术鉴别方法。方法根据乌龟Chinemys reevesii及其混伪品的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(cytochrome oxidase subunitⅠ,COI)基因序列上的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)位点设计鉴别引物,扩增产物直接进行HRM分析,并优化反应体系,根据最佳条件进行适用性验证。结果在模板DNA质量浓度为0.62~374.88 ng/μL、引物浓度为0.1~0.4μmol/L、退火温度为62℃、循环数为45个的条件下,龟甲饮片和配方颗粒的熔解曲线为单峰,其Tm均值分别为(82.39±0.09)、(82.38±0.05)℃,而混伪品和醋龟甲配方颗粒未有扩增。结论该研究建立的高分辨熔解曲线鉴别方法可快速鉴别龟甲原料和配方颗粒的真伪,以及区分其生品和炮制品配方颗粒,为龟甲配方颗粒的质量标准研究提供了理论依据。

摘要：目的:建立一种醋龟甲配方颗粒特异性位点聚合酶链式反应(PCR)鉴别方法。方法:根据乌龟Chinemys reevesii(Gray)及其混伪品的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因序列上的单核苷酸多态性位点设计醋龟甲的特异性鉴别引物,经过优化反应体系,确定最佳的PCR反应条件,并对该方法进行耐受性和适用性考察。结果:当退火温度为62℃、循环数为34时,醋龟甲饮片、标准汤剂冻干粉和配方颗粒均可在约92 bp处得到清晰单一的特异性条带,其混伪品及阴性对照均无条带。结论:建立的位点特异性PCR鉴别方法可快速、准确地鉴别醋龟甲饮片、标准汤剂冻干粉和配方颗粒的真伪,为醋龟甲配方颗粒质量标准研究提供了参考。

摘要：目的:建立一种鳖甲配方颗粒特异性聚合酶链式反应(PCR)鉴别方法。方法:根据中华鳖Trionyx sinensis及其混伪品的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COXⅠ)基因序列,筛选出中华鳖的特异性单核苷酸多态性(SNP)位点,设计鳖甲鉴别专属引物BJ-5F及BJ-5R。通过优化PCR反应条件,确定最佳的PCR反应体系,并对该方法进行耐受性、适用性考察和测序验证。结果:当退火温度为60℃,循环33次时,鳖甲药材、标准汤剂冻干粉及配方颗粒均可在约236 bp处得到清晰单一的中华鳖条带,其混伪品及阴性对照品均无此条带。结论:该研究所建立的特异性PCR鉴别方法适用于快速鉴定鳖甲药材、标准汤剂冻干粉及配方颗粒的真伪,且具有专属性强、准确性高、简便易行等特点,为鳖甲配方颗粒质量标准的制定提供了参考依据。

摘要：为建立一种能同时鉴别人参、三七、西洋参及其掺杂品的方法。通过分析人参属ITS,18S和matK序列,寻找特异性SNP位点设计引物,建立多重位点特异性PCR法,并对不同来源的人参、三七、西洋参样品进行扩增,根据特异性条带大小进行鉴别。在退火温度为60℃,循环数为35时,人参、三七和西洋参分别出现约250,500,1000 bp的特异性条带。该方法对于人参、三七、西洋参相互掺杂的混合样品,人参中掺杂三七或西洋参以及三七中掺杂西洋参或人参的检出限均为0.5%,对西洋参中掺杂人参的检出限为0.5%,掺杂三七的检出限为1%。表明建立的多重位点特异性PCR可用于人参、西洋参、三七的掺杂鉴定。

摘要：目的建立一种同时鉴别牛膝和川牛膝药材及配方颗粒的多重位点特异性PCR鉴别方法。方法通过比较牛膝属相近物种核基因ITS序列,设计牛膝和川牛膝的特异性引物,经过优化PCR反应体系及PCR反应条件,建立了牛膝和川牛膝配方颗粒的多重位点特异性PCR鉴别方法。结果在退火温度为58℃、循环次数为31时,牛膝和川牛膝配方颗粒分别可扩增出187 bp和164 bp的特异性条带。该方法对牛膝和川牛膝药材的掺伪检出限分别为1%、5%,对两者配方颗粒的掺伪检出限分别为10%、50%。结论所建立的多重位点特异性PCR鉴别可有效鉴别牛膝和川牛膝配方颗粒及其掺伪体系。

摘要：目的:优选紫苏子最佳炒制工艺,并阐明不同炒制工艺对紫苏子化学成分的影响。方法:采用UPLC法,分别以迷迭香酸含量及基于主成分分析的迷迭香酸及木犀草素标准化值为指标,通过正交设计考察电炒锅功率、炒制时间及翻动频率三个变量,对紫苏子饮片炒制工艺的影响,综合评价得到紫苏子的最佳炒制工艺。结果:紫苏子最佳炒制工艺为:控制锅温为190℃,电炒锅功率为1000W,炒制时间4min,翻动频率为60次/min。结论:紫苏子炒制工艺简便、稳定、可量化。