摘要：目的:应用RNA干扰技术抑制人肝细胞癌细胞系HepG2细胞DcR3表达,并研究DcR3基因沉默后对HepG2细胞凋亡和迁移能力的影响.方法:设计并合成特异性DcR3-siRNA 4条和阴性对照siRNA 1条,转染HepG2细胞,通过半定量反转录-PCR(RT-PCR)及免疫细胞化学方法检测其对DcR3表达的抑制作用并筛选出干扰效果最强的siRNA,应用流式细胞仪、DNA ladder方法检测细胞的凋亡情况,应用划痕实验检测细胞体外迁移能力的变化.结果:各特异性DcR3-siRNA均能抑制DcR3mRNA表达(P<0.05),其中以DcR3-siRNA4的抑制作用最明显,抑制作用达62.9%;将DcR3-siRNA4转染HepG2细胞能明显抑制HepG2细胞DcR3蛋白的表达(P<0.01).流式细胞仪检测结果显示,特异性DcR3-siRNA转染组细胞的凋亡率(22.97%±2.10%)明显高于空白对照组(1.17%±0.32%)、脂质体转染组(1.44%±0.43%)和非特异性siRNA转染组(1.22%±0.40%)(均P<0.001);DNA ladder实验发现特异性DcR3-siRNA转染组出现DNAladder,而空白对照组、脂质体转染组和非特异性siRNA转染组均未出现DNA ladder.划痕实验结果显示,转染后24、48和72 h,特异性DcR3-siRNA转染组细胞的相对迁移率均低于空白对照组、脂质体转染组和非特异性siRNA转染组.结论:DcR3在肝癌细胞的凋亡及迁移中发挥重要作用,抑制DcR3的表达能诱导肝癌细胞凋亡并降低肝癌细胞的迁移能力.

摘要：目的筛选介导表皮生长因子受体(EGFR)小干扰RNA(siRNA)转染肝癌HepG2细胞的试剂,并优化转染条件。方法设计靶向EGFR的特异性siRNA,分别用Lipofectamine 2000、siPORT Amine、ICAFectin 442、N-TER nanoparticle、X-tremeGENE、polyMagnetofection、combiMAGnetofection介导转染肝癌HepG2细胞48、72 h。实时定量RT-PCR检测HepG2细胞的EGFR mRNA,计算敲除EGFR mRNA率,据此筛选出最佳转染试剂,继续进行不同试剂用量、不同siRNA浓度、正反向转染的对比。测算转染后细胞存活率及转染率。结果 Lipofectamine2000、siPORTAmine及combiMAGnetofection介导转染72 h后,HepG2细胞的EGFR mRNA敲除率均超过65%。2μl的combiMAGnetofection及200 nM的EGFR siRNA组合、72 h时HepG2细胞的EGFR mRNA沉默效率最高(90%±1%),其细胞存活率为94%±8%,转染率超过95%。结论介导EGFR siRNA转染HepG2细胞的最佳试剂是combiMAGnetofection,优化转染条件为2μl的combiMAGnetofection、200 nM的EGFR siRNA、转染72 h。

摘要：目的探讨特异性诱捕受体3(decoy receptor 3,DcR3)的siRNA对HepG2细胞生物学特性的影响。方法设计并合成针对DcR3的siRNA,用脂质体转染HepG2细胞,通过半定量RT-PCR及免疫细胞化学法检测其对DcR3表达的抑制作用;应用MTT法、流式细胞术、划痕实验检测转染后HepG2细胞增殖、凋亡及迁移能力的变化。结果特异性DcR3-siRNA能抑制DcR3 mRNA和蛋白表达(P<0.05);MTT实验结果:转染后24、48和72 h特异性DcR3-siRNA转染组细胞吸光度值低于空白对照组、脂质体转染组及非特异性siRNA转染组(P<0.001),特异性DcR3-siRNA转染组细胞的增殖抑制率在24、48和72 h分别为20.71%、35.00%和34.04%;转染后72 h,特异性DcR3-siRNA转染组细胞与空白对照组、脂质体转染组及非特异性siRNA转染组细胞相比,G1期细胞比例增多而G2/M期细胞比例减少(P<0.01);流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示,特异性DcR3-siRNA转染组细胞凋亡率(22.97%±2.10%)高于空白对照组(1.17%±0.32%)、脂质体转染组(1.44%±0.43%)及非特异性siRNA转染组(1.22%±0.40%)(P<0.001);划痕实验结果显示,转染后24、48和72 h,特异性DcR3-siRNA转染组细胞的相对迁移率均低于空白对照组、脂质体转染组及非特异性siRNA转染组细胞(P<0.001)。结论特异性DcR3-siRNA能有效抑制肝癌细胞系HepG2的DcR3表达,诱导细胞凋亡,并能抑制HepG2细胞的增殖和迁移能力。

摘要：目的:构建携带人端粒酶逆转录酶基因(hTERT)慢病毒表达载体LV3-shRNA-hTERT及其病毒包装鉴定并稳定转染宫颈癌Caski细胞系。方法:使用Designer3.0(Genepharma)软件设计靶向hTERT的小发卡RNA(shRNA)序列,将hTERT-shRNA基因片段插入慢病毒载体pGLV3/H1/GFP+Puro中,构建慢病毒表达质粒LV3-shRNA-hTERT。通过酶切、DNA测序验证hTERT片段的准确性,将LV3-shRNA-hTERT与包装质粒共转染293T细胞,浓缩上清并测定病毒滴度获得重组慢病毒,将该重组慢病毒感染Caski细胞,通过观测绿色荧光蛋白(GFP)的表达判断转染成功与否以及估计转染效率,RTPCR、Western blot分别测定转染后不同时间点的hTERTmRNA水平和hTERT蛋白表达情况,TRAP-ELISA法测定细胞端粒酶活性。结果:LV3-shRNA-hTERT携带正确hTERT基因,重组病毒经PCR证实hTERT-shRNA基因插入。利用重组慢病毒介导将重组质粒LV3-shRNA-hTERT高效转导入宫颈癌Caski细胞并稳定表达,荧光显微镜观察转染后24 h Caski细胞即开始发出绿色荧光,72 h后有大量荧光表达,而在稳定转染空质粒的Caski细胞中不表达。检测转染后的Caski细胞,发现有3条链能明显抑制hTERT mRNA和蛋白水平的表达,并显著降低了细胞端粒酶活性,其中以72H-TERT-1515抑制作用最强,对hTERTmRNA和蛋白的抑制率分别达75.0%和70.3%,端粒酶活性下降74.6%。结论:成功构建携带hTERT-shRNA慢病毒表达载体LV3-shRNA-hTERT,并稳定转染Caski细胞系,实验设计的shRNA能有效抑制宫颈癌Caski细胞hTERT mRNA水平和hTERT蛋白表达,并显著降低细胞端粒酶活性。为端粒酶在宫颈癌发病机制的研究、宫颈癌基因治疗的体外干扰治疗奠定了工作基础。

摘要：以广西医科大学为例，介绍博士研究生招生网络管理平台的优点，阐述博士研究生招生考试录取工作主要流程，论述博士研究生招生网络管理功能及管理平台的设计。

摘要：目的探讨特异性DcR3-siRNA对人肝细胞癌细胞系HepG2的DcR3基因表达的影响。方法设计并合成带FAM荧光标记的针对DcR3的siRNA4条和非特异性siRNA1条,用脂质体转染HepG2细胞,应用荧光显微镜和流式细胞仪判断转染效果;应用半定量RT-PCR和免疫细胞化学检测特异性DcR3-siRNA的对HepG2细胞中DcR3表达的抑制作用。结果各特异性DcR3-siRNA均能抑制DcR3 mRNA表达(P<0.05),其中以siRNA4的作用更明显,干扰作用达62.9%;将siRNA4转染HepG2细胞,免疫细胞化学结果显示,siRNA4能明显抑制HepG2细胞中DcR3蛋白的表达(P<0.01)。结论特异性DcR3-siRNA在体外实验能抑制目的基因的表达。

摘要：目的:探讨关节镜下前交叉韧带损伤重建术后的功能康复。方法:回顾分析了1990年～1997年间我科收治并且目前能随访到的21例膝前交叉韧带损伤后采用关节镜下双股半腱肌腱重建的患者,术后均采用我科制订的系统康复治疗计划进行康复训练,随访时间98～168个月,平均127.36个月。对其术前和近期的自我感觉、查体及Lysholm膝关节评分、IKDC(International Knee Documentation Comminee)分级标准评定的情况进行分析。结果:21例术前弹响、交锁和打软腿的症状均消失,浮髌试验均为阴性,均无过伸痛。关节轻度疼痛11例,Lachman征阳性3例,前抽屉试验阳性8例,但均无关节不稳的主诉。无取腱造成的其它并发症。Lysholm膝关节评分术后优于术前,差异有显著性意义(P<0.05)。IKDC评分结果术后明显优于术前。术后平均4.65个月恢复日常活动,恢复体育锻炼时间均在6个月左右。有2例伸直受限(差10°),所有患者屈曲活动度基本正常,结论:ACL损伤重建的术后患者经过我们所设计实施的康复计划的训练后,没有关节不稳的主诉,屈伸活动度满足日常生活需要,对术后的功能均较满意。

摘要：目的设计关节镜下股四头肌腱髌骨块嵌入和异体骨栓挤压固定方法重建后交叉韧带(PCL),观察其治疗PCL损伤的疗效。方法自2002年6月-2005年12月,对13例PCL损伤患者采用关节镜下股四头肌腱髌骨块嵌入和异体骨栓挤压固定方法进行重建。股四头肌腱移植物的获取中保证髌骨上极和股四头肌腱条的连接;股骨隧道制作为“瓶颈”样;股四头肌腱移植后将与之连接的髌骨块敲击嵌入股骨“瓶颈”样隧道,胫骨隧道内用特制异体骨栓挤压固定移植肌腱。治疗效果采用Lysholm评分和国际膝关节文献委员会(IKDC)的分级标准评定。结果所有患者获得3-37个月(平均19个月)随访,无患者发生神经血管损伤、移植物失败等严重并发症。所有患者均无膝关节不稳定症状,2例患者客观检查有后向不稳定体征;除3例患者剧烈活动后关节疼痛外,其余患者关节疼痛症状明显缓解。1例患者髌骨上极股四头肌腱内有少许钙化现象。Lysholm评分术后高于术前,差异有极显著性意义(P<0．01);IKDC评定结果明显优于术前。结论采用股四头肌腱移植物对取材部位无不良影响,移植物生物力学特性更接近PCL,且可以切取任意长度和宽度,保证远大于PCL的强度。移植物固定采用本设计的骨块嵌入和异体骨栓挤压的方法,成功率高、并发症少,有明显优越性。

摘要：医学研究生的培养是高素质综合型医学人才培养的重点,近年来研究生出现自主性减弱问题,主要表现为获取学科前沿进展的主动性不强,科研课题依赖导师项目,科学研究过程独立性欠缺以及拖延行为。本文针对这些问题提出相应的解决策略,如强调研究生带教,开展研讨会,鼓励研究生创新课题设计,夯实理论基础与实验技术,设定计划解决拖延等。