摘要：在马占相思组织培养初步取得成功的基础上 ,采用二次正交旋转组合设计对马占相思增殖培养基进行优化 ,建立增殖率 (Y)对Ca2 +浓度 (X1)、6 BA浓度 (X2 )及NAA浓度 (X3 ) 3个试验因子的正交回归模型 :y=2 2 80 -0 1 68X1-0 2 5 9X2 +0 1 85X21 -0 2 1 0X22 +0 1 67X23+0 3 2 6X1X2 ,从模型推知 ,当Ca2 + 浓度为 0 5 8倍常规MS培养基浓度 ,6 BA为 0 76mg/L ,NAA为 0 1 6mg/L时 ,增殖率达最大值为 4 3 2 1 ,与事实验证结果相符。

摘要：通过二次正交旋转组合设计对尾叶桉叶盘愈伤组织分化培养基优化 ,获得尾叶桉 (Eucalyptusuro phylia)叶盘外植体的再生植株。将携带外源目的基因的根癌农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens)与尾叶桉U6无性系叶盘共培养 ,经愈伤组织诱导、卡那霉素筛选和植株再生 ,获得 2 0个小芽 ,再将小芽转入附加卡那霉素(Kam) 4 0 μg·mL- 1 的E3-B培养基中诱根 ,获得 8株存活且可再生的转化子。取转化苗叶片作胭脂碱合成酶活性检测电泳后呈阳性 ;分别以γ 32 p dCTP及地高辛标记柞蚕抗菌肽D基因作探针 ,与转化苗DNA作点杂交及Southern印迹杂交检测 ,结果均呈阳性。以上结果表明 ,柞蚕抗菌肽D基因已整合到尾叶桉基因组中。将从桉树青枯病重病区分离的强毒青枯菌 (Pseudomonasspp .)株 (9910 16 )以 1× 10 9cfu·mL- 1 浓度接种转化试管苗 ,以未经转基因的尾叶桉U6 无性系试管苗为对照 ,结果表明转化苗接种死亡率 5 6 7% ,对照死亡率为 86 7% 。

摘要：植原体病害是严重危害农业生产的一类植物病害,早期检测是预防植原体病害的主要途径之一。利用基因芯片检测技术能够实现高通量、快速检测植原体病原。本研究通过分析比对11种植原体16S rDNA序列,设计并合成相应的特异性探针,进一步制备了植原体检测基因芯片,并利用所制备的基因芯片对发病桑树植株进行了检测,检测结果表明本实验室制备的植原体检测基因芯片具有较高的特异性,为植原体检测基因芯片技术的推广应用奠定了基础。

摘要：[Objective] This study aimed to increase the expression level of immun- odominant membrane protein gene （Imp） of phytoplasmas in E. coil BL21 （DE3）. [Method] On the basis of orthogonal experiment, effects of different culture conditions on recombinant bacteria E. coil BL21-pET-28a（＋）-Imp were investigated. Based on the obtained optimal culture condition, effects of different induction conditions on the ex- pression level of Imp protein were explored. The expression level of Imp fusion pro- tein was analyzed by using SDS-PAGE and Gene Tools software. [Result] The re- sults showed that the optimal conditions for culture were at 37℃, pH 7.0, with liq- uid volume of 20% and oscillation speed of 200 r/min, for induction were at 37℃ for 6 h, with initial OD600 of about 1.5 and IPTG final concentration of 0.1 mmol/L. [Conclusion] The expression level of Imp achieved 70.98 mg/L under the optimal conditions. Optimized conditions for expression of Imp fusion protein in E. coil were determined.

摘要：[目的]为提高植原体膜蛋白Imp基因在*** BL21(DE3)中的表达量,优化Imp基因的原核表达条件。[方法]通过设计正交试验,考察不同的培养条件对工程菌*** BL21(DE3)-pET-28a(+)-Imp的影响。在获得最佳培养条件的基础上考察不同诱导条件对Imp蛋白表达量的影响。利用SDS-PAGE和Gene Tools凝胶分析软件分析融合蛋白Imp的表达量。[结果]表达条件优化结果表明,最佳培养条件为:温度37℃,pH 7.0,装液量20%,振荡速度200 r/min;最佳诱导条件为:温度37℃,起始OD600≈1.5,IPTG终浓度0.1mmol/L,诱导培养时间6 h。[结论]在最佳条件下Imp表达量达70.98 mg/L,确定了Imp融合蛋白在大肠杆菌的优化表达条件。