摘要：背景:由于骨髓间充质干细胞能分泌多种对退变胆碱能神经元有保护作用的神经营养因子,因此为阿尔茨海默病的治疗提供了新希望。目的:观察骨髓间充质干细胞分泌物对Aβ1～40损伤PC12细胞凋亡的保护作用。设计、时间及地点:随机分组设计,对比观察,于2008-01/10在中国医科大学神经内科实验室完成。材料:体质量150g左右的SD大鼠,雌雄不拘。方法:在体外培养、纯化骨髓间充质干细胞并收集其培养上清,实验分为4组:①空白对照组:在细胞培养体系中不加入任何药物和上清液。②骨髓间充质干细胞上清液组:细胞接种后24h在细胞培养体系中加入骨髓间充质干细胞上清液30,60,120μL,并用体积分数为5%胎牛血清/RPMl1640将终体积补足至300μL,使其上清液体积分数分别为10%,20%,40%。③Aβ1～40损伤组:以10mg/LAβ1～40刺激PC12细胞,终浓度为5,10,20mg/L;换用1640培养24h后,收集受损PC12上清培养液。④联合培养组:以10mg/LAβ1～40刺激PC12细胞过夜(阿尔茨海默病细胞模型),除去培养上清,换用1640培养24h后,收集受损PC12上清作为条件培养液,分别给予骨髓间充质干细胞上清液30,60,120μL,各组细胞给药后24h和48h进行指标检测。主要观察指标:①骨髓间充质干细胞表面抗原鉴定。②骨髓间充质干细胞分泌物对PC12细胞活力的影响。结果:骨髓单个核细胞培养2～5d为生长潜伏期,细胞增殖较慢,细胞数变化不明显。6～12d为细胞快速增殖期,排列有一定方向性,呈旋涡样生长。培养15～18d,细胞出现80%～90%的融合,克隆间出现重叠。胰酶消化传代的细胞于12h内完全贴壁、伸展并重新变为长梭形,生长迅速,7～10d达到完全融合。骨髓间充质干细胞表面抗原的鉴定通过免疫荧光检测显示,CD45表达为阴性,证明其为非造血类细胞;CD44表达阳性。②Aβ1～40的终浓度为5,10,20mg/L孵育24,48h后,细胞活力与空白对照组相比均降低(P<0.01),且随着Aβ1～40质量浓度的增大,活力降低越明显。与Aβ1～4010mg/L孵育24,48h组相比,联合培养组细胞活力上升,且相邻剂量间两两比较差异均有显著性意义(P<0.05);作用24,48h骨髓间充质干细胞上清液组各浓度组与空白对照组相比,细胞活力没有变化。结论:骨髓间充质干细胞对Aβ1～40损伤的PC12细胞凋亡有保护作用,其保护作用的强弱与骨髓间充质干细胞上清液浓度有关。